芪蓝复方对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

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目的探讨自拟芪蓝复方对环磷酰胺(CY)致免疫抑制模型小鼠免疫功能的影响,初步阐明其免疫调节的作用机制,为芪蓝复方的应用提供理论依据,也为兽医临床免疫抑制病的防治提供参考。方法(1)108只KM小鼠随机分为6组,即空白组(NCG)、模型组(CYG)、不同剂量芪蓝复方组(QL1G、QL2G、QL3G)以及阳性对照组(LMSG)。NCG腹腔注射生理盐水,其余组别腹腔注射80mg/kg·BW的CY,连续3d。NCG和CYG灌服蒸馏水,QL1G~QL3G分别灌服4g/kg·BW、8g/kg·BW和16g/kg·BW的芪蓝复方水煎液,LMSG灌服20mg/kg·BW左旋咪唑(LMS),连续14d。分别检测体重、采食量、血常规、血浆免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)、补体(C3、C4)以及细胞因子(IL-2、IL-4、IL-8、IL-10、IL-13、TNF-α、IFN-γ)含量、免疫器官指数、脾淋巴细胞增殖率、巨噬细胞吞噬指数、外周血淋巴细胞表型(CD4+/CD3+)和抗氧化指标(T-AOC、T-SOD、GSH-Px、MDA)。(2)60只KM小鼠随机分为6组,即空白组(NCG)、模型组(CYG)、不同剂量芪蓝复方组(QL1G、QL2G、QL3G)以及阳性对照组(LMSGXNCG腹腔注射生理盐水,余组腹腔注射80mg/kg-BW的CY,连续3d。NCG和CYG灌服蒸馏水,QL1G~QL3G分别灌服 4g/kg·BW、8g/kg·BW 和 16g/kg ·BW 的芪蓝复方水煎液,LMSG灌服20mg/kg·BW左旋咪唑(LMS),连续14d。分别进行肠道组织切片观察并计算绒毛长度、和隐窝深度、V/C 比值,肠道免疫细胞计数,检测紧密连接蛋白ZO-1表达量,肠道sIgA含量,以及TLR4/Mdy88/NF-κB通路的变化情况。结果(1)①与NCG相比,CYG体重末重、增重、采食量、吞噬指数、T和B细胞刺激指数SI、细胞因子、免疫球蛋白和补体含量都有极显著的降低(p<0.01),胸腺指数、脾脏指数有极显著的升高(p<0.01),表明免疫抑制模型构建成功。②与CYG相比,QL1G~QL3G小鼠末重与增重有极显著的升高(p<0.01),LMSG末重与增重显著升高(p<0.05);QL1G~QL3G和LMSG脾脏指数有显著降低(p<0.05),而胸腺指数有极显著降低(p<0.01)。③与CYG相比,QL2G的T细胞刺激指数SI有显著的升高(p<0.05),QL3G的T细胞刺激指数SI有极显著升高(p<0.01),QL1G~QL3G和LMSG的B淋巴细胞刺激指数SI有极显著的升高(p<0.01);QL2G和LMSG碳粒廓清指数K有显著的升高(p<0.05),QL3G碳粒廓清指数K有极显著升高(p<0.01),QL1G的吞噬指数α显著升高(p<0.05),QL2G、QL3G、LMSG有极显著的升高(p<0.01)。④与CYG相比,QL1G~QL3G和LMSG中免疫球蛋白含量均有极显著升高(p<0.01);QL1G的补体含量显著提高(p<0.05),QL2G、QL3G和LMSG的补体含量有极显著的升高(p<0.01);QL1G~QL3G、LMSG 中的 IL-2 含量极显著升高(p<0.01),QL1G 中 IL-4、IL-10、IL-13 的含量显著升高(p<0.05),QL2G、QL3G、LMSG 的IL-4、IL-10、IL-13 的含量极显著升高(p<0.01);QL1G、QL2G、LMSG 中 IFN-γ 的含量显著升高(p<0.05),QL2G、QL3G、LMSG的TNF-α含量显著上升。⑤与CYG相比,QL1G~QL3G、LMSG的MDA含量极显著下降(p<0.01),QL3G的T-AOC、SOD、GSH-Px活力有极显著升高(p<0.01)。(2)①与NCG相比,CYG小鼠绒毛长度、V/C比值极显著下降(p<0.01),隐窝深度极显著增厚(P<0.01);与CYG相比,QL1G~QL3G和LMSG的绒毛长度、V/C 比值均极显著升高(P<0.01),隐窝深度极显著变薄(P<0.01)。②与NCG相比,CYG小鼠肠道中杯状细胞(GC)数量极显著降低(P<0.01);与CY相比,QL1G~QL3G和LMSG小鼠肠道中GC数量极显著升高(P<0.01)。③与NCG相比,CYG的ZO-1蛋白表达量较低,与CYG相比,QL1G~QL3G、LMSG蛋白表量水平随着芪蓝复方的浓度升高而增加。NCG的ZO-1相对表达量极显著高于CYG、QL1G~QL3G和LMSG(P<0.01);与 CYG 相比,QL1G~QL3G 的 ZO-1 相对表达量显著升高(P<0.05)。④与NCG相比,CYG的TLR4/Mdy88/NF-κ B信号通路表达水平极显著下降(P<0.01);与CYG相比,QL2G、QL3G小鼠的TLR4、Mdy88表达水平极显著升高(P<0.01);在NF-κ B因子的水平中,QL1G~QL3G小鼠比CYG具有极显著的升高(P<0.01)。⑤与NCG相比,CYG的SIgA含量极显著降低(P<0.01);与CYG相比,QL1G~QL3G、LMSG的SIgA含量极显著上升(P<0.01)。结论芪蓝复方能够从细胞免疫、体液免疫、肠道免疫等多个层面,对CY致免疫抑制小鼠的免疫损伤发挥显著的修复作用,对于畜禽免疫抑制病的防治,具有潜在的临床应用价值。
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