目的:本研究拟以环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）为基础,构建基于同化探针和热敏UDG酶的环介导等温扩增方法,实现HPV16及HPV18的高灵敏、高特异性检测。方法:1、运用在线LAMP引物设计软件Primer Explorer V5,针对HPV16、18基因保守序列设计引物,在反应前加入核酸染料SYBR GreenⅠ并对LAMP反应体系中内引物、Mg²⁺、d NTPs进行优化,优化结果通过实时荧光扩增曲线确定;然后对优化的HPV16、18 LAMP反应体系进行特异性、灵敏度检测及临床标本检测。2、在LAMP反应设计的环状引物区域（即F1和F2或B1和B2之间）设计可特异性识别该区域、通过链置换原理产生荧光信号的寡核苷酸探针。利用该方法对HPV16和HPV18质粒进行10倍系列稀释检测其灵敏度。用已知HPV亚型的临床标本进行特异性检测及临床标本进行比对验证。3、根据HPV18 L1基因设计了一组特异性LAMP扩增引物,初步建立了UDG-LAMP体系。结果:1、建立的实时荧光环介导等温扩增体系检测HPV16及HPV18的特异性为100%,与PCR方法的符合率为100%。该体系检测HPV16及HPV18质粒的灵敏度为10拷贝/反应。2、通过HPV16和HPV18的特异性引物和同化探针,双重实时LAMP在63℃反应60min完成扩增,从而可以根据不同的荧光扩增曲线进行区分。在单重实时LAMP反应中分析的HPV16和HPV18的检测限均小于100拷贝/反应。而对于双重实时LAMP反应检测HPV16和HPV18的检测限为10拷贝/反应。另外,在临床标本中,HPV16、HPV18单一感染和HPV16、18共同感染样本的阳性率与临床实验室PCR结果的符合率分别为95%,100%,100%。3、与传统实时LAMP相比,实时UDG-LAMP反应可以有效地消除反应产生的气溶胶污染,在一定程度上降低了实时LAMP方法检测的假阳性率,提高了准确率。结论:1、建立的基于同化探针的实时双重荧光环介导等温扩增体系能简便、快速,灵敏地检测HPV16及HPV18,该方法扩展应用于其它HPV亚型检测,或可促进HPV感染的早期筛查。2、实时LAMP检测方法简单,特异且快速,有可能成为即时检测（Point-of-care）的有效工具。3、利用热敏UDG酶消除气溶胶污染的方法有助于体外核酸扩增方法在即时检测方面的推广及应用。