本研究以青鱂为模式生物研究半滑舌鳎性别分化相关基因的表达情况，为海水鱼基因功能研究提供了新的思路。本研究从三个方面进行阐述：一是异源和同源dmrt1基因过表达载体构建；二是异源和同源dmrt1基因过表达载体在青鳉体内的整合和表达分析；三是olcsw1Talen载体在青鱂体内基因敲除分析。主要实验结果如下：1.异源和同源dmrt1基因过表达载体构建。提取半滑舌鳎和青鱂精巢组织RNA，并进行RT-PCR反转录获得大量cDNA，通过BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切，与同样经过这两种酶双酶切的pIRES-hrGFP-1a载体进行连接，启动子为巨噬细胞病毒（CMV）启动子，分别构建含有半滑舌鳎和青鱂dmrt1基因的过表达载体。分别命名为：pIRES-Csdmrt1-hrGFP-1a和pIRES-Oldmrt1-hrGFP-1a。通过质粒提取获得大量过表达载体质粒溶液。2.异源和同源dmrt1基因过表达载体在青鳉体内的整合和表达分析。采用显微注射的方式将两种过表达载体稀释至30ng/μl,分别导入到青鱂1细胞受精卵中，比较异源和同源dmrt1基因对青鳉胚胎孵化率的影响以及两种dmrt1基因在青鳉体内的基因整合率、基因表达率及对芳香化酶(cyp19a)的影响。结果表明,注射48h后,两种载体均在胚胎内大量表达,实验统计了青鱂胚胎的存活状况，注射青鳉同源性dmrt1载体的受精卵孵化率(69.5%)要显著高于注射异源性dmrt1载体的受精卵(36.5%)，但是均低于对照组（92%）。30dph(days post hatching)两组注射的小鱼均能检测到基因整合,注射同源dmrt1的整合率(30%)要高于异源dmrt1(10%)。30dph小鱼体内检测不到异源性dmrt1载体的表达,但能检测到同源dmrt1载体的RNA表达,同时芳香化酶基因的表达受到了抑制。对照组未能检测到过表达载体的整合和表达。本研究为研究半滑舌鳎性别分化相关基因功能提供了新的思路,并为在模式鱼类中研究海水鱼相关基因功能累积了必要的资料。3. olcsw1Talen载体在青鱂体内基因敲除分析。通过同源比对发现，半滑舌鳎雌性特异基因csw1与其在青鱂体内的同源基因olcsw1的同源性高达75%。通过半定量分析结果表明，csw1和olcsw1具有相似的基因表达模式：在卵巢中大量表达，在精巢和其他组织中几乎不表达。通过进一步分析olcsw1的基因结构，我们构建了olcsw1Talen载体，稀释至250ng/μl并通过显微注射方式导入青鱂受精卵1细胞中，注射胚胎通过电泳检测和测序分析，结果表明：olcsw1基因敲除率高达90%以上，并且含有多种不同的敲除类型。将注射后的孵化的仔鱼养至性成熟（F0），注射后雌雄表型比例没有发生明显的变化，接近1:1。通过RT-PCR检测发现注射后的青鳉成鱼性腺中olcsw1表达微弱甚至不表达。同时olcsw1基因敲除后对于cyp19a1a, foxl2,dmrt1, gsdf等基因的影响不显著,但能提高sox9b及amh在卵巢中的表达。因此我们推测青鳉olcsw1可能间接参与雌性性别分化过程。需要进一步筛选可遗传F0代成鱼，并建立纯合基因敲除品系并在该品系中进一步研究基因的功能。