外阴鳞状细胞癌肿瘤干细胞的分选和鉴定

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外阴鳞状细胞癌(vulvar squamous cell carcinoma,VSCC)约占外阴恶性肿瘤80%-90%,常见于60岁以上妇女,5年存活率为58.9%-68.9%。研究结果表明外阴鳞癌的发生主要与人类乳头状瘤病毒(HPV)的感染有关,外阴硬化苔藓、外阴不典型增生及P53的突变均与外阴癌的发生有关,另外,人类免疫缺陷病毒(HIV)、单纯疱疹病毒(HSV)Ⅱ是外阴癌发生的风险因素,但其确切发病、浸润与转移机制尚不清楚。外阴鳞状细胞癌的治疗是以手术为主要治疗手段,对癌灶组织分化较差和中晚期病例辅助放、化疗。目前,还没有预防外阴鳞状细胞癌远处转移和复发的有效办法,因此,对该疾病的充分认识和开拓新的治疗途径的探索十分必要。   肿瘤干细胞理论的出现为恶性肿瘤的彻底根治带来了曙光,癌干细胞是成肿瘤细胞,具有干细胞的特性,如:自我更新、高移动能力(转移和侵袭能力)、药物耐受性和高增殖能力。外阴鳞状细胞癌肿瘤干细胞的研究尚处在起步阶段,有许多基础性工作尚需完善,CD44作为肿瘤干细胞的特异性表面标志物得到广泛认可,CD44是一种细胞表面糖蛋白,在细胞间相互作用、细胞黏附和迁徙中起作用,有淋巴细胞激活、再生、定植、造血和细胞转移的作用,通过透明质酸黏附在细胞转移、肿瘤生长和进展中起重要作用。   本研究,利用CD44为外阴鳞状细胞癌特异性标志物分选外阴鳞癌细胞系A-431细胞系中的CD44+细胞亚群,全面对比CD44+和CD44-肿瘤细胞亚群的生物学特性,为外阴鳞状细胞癌肿瘤干细胞的深入性研究奠定基础。   目的:   分离出A-431细胞中CD44+的肿瘤细胞亚群,鉴定CD44+的VSCC亚群细胞具有肿瘤干细胞的特性。   方法:   1、采用CD44免疫荧光抗体标记流式细胞术分选出CD44+的细胞亚群;   2、检测各细胞亚群的细胞周期;⑧检测CD133、CD34蛋白在CD44+和CD44-中表达的差异。   结果:   1、A-431细胞中CD44+的细胞亚群约占4%;   2、胚胎干细胞因子CD133、CD34在CD44+和CD44-的VSCC中表达存在显著性差异;   3、CD44+的肿瘤细胞亚群97.69%处于G1期,CD44-的肿瘤细胞亚群61.12%处于S期。   结论:   1、在A-431细胞系中CD44可以作为分选肿瘤干细胞的特异性表面标志物;   2、利用CD44为VSCC的特异性表面标志物从A-431细胞系中分选出的CD44+细胞亚群的比例约为4%;   3、CD133、CD34在CD44+的肿瘤细胞中表达相对较高,可能成为分选VSCC的特异性表面标志物;   4、CD44+肿瘤细胞具有典型的干细胞增殖特点,大部分细胞处于静息期(G1期),而大部分的CD44-肿瘤细胞处于活跃的增殖期(S期)。
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