【摘 要】
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随着我国人口逐渐趋于老龄化,工业化生产所带来的污染和科技发展所带来的生活习惯的改变等因素,中国人的肿瘤发病率和死亡率大幅度持续性地上升。对于肿瘤的预防和治疗,越来越受到大家的重视和关注。阿霉素(Doxorubicin,简称为Dox)作为一种治疗肿瘤的特效药,一直被广泛使用。但是阿霉素对人体的各个器官有较强的毒副作用影响。因此,科研工作者们提出了很多解决方案,依靠药物载体是可行性较高的策略之一。本课
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随着我国人口逐渐趋于老龄化,工业化生产所带来的污染和科技发展所带来的生活习惯的改变等因素,中国人的肿瘤发病率和死亡率大幅度持续性地上升。对于肿瘤的预防和治疗,越来越受到大家的重视和关注。阿霉素(Doxorubicin,简称为Dox)作为一种治疗肿瘤的特效药,一直被广泛使用。但是阿霉素对人体的各个器官有较强的毒副作用影响。因此,科研工作者们提出了很多解决方案,依靠药物载体是可行性较高的策略之一。本课题观察发现多种细胞上均存在细胞表面囊泡(Cell-bound membrane vesicles,简称为CBMVs)。本课题组对细胞表面囊泡进行了多方面的研究,例如对囊泡组分的鉴定、运动规律和对细胞的影响等,并已对该种囊泡的分离提取和载药进行了初步探索。在这个基础之上,我们猜测,修饰后的细胞表面囊泡也许可作为一种有效的抗肿瘤药物靶向载体系统,从而达到提高抗肿瘤药物的治疗效果、降低药物毒副作用以及减缓肿瘤耐药性的目的。为了验证这个猜想,本课题利用Triton X-100处理和蔗糖梯度高速离心法将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表面的囊泡成功分离、提取,随后通过超声波降解法使阿霉素能够成功被细胞表面囊泡包裹,并将iRGD-PEG-DPSE修饰在囊泡表面。得到iRGD-阿霉素-细胞表面囊泡(简称iRGD-囊泡-阿霉素),并使用高效液相色谱测得包封率为44.78%、载药量为447.79μg/m L)。使用红外光谱以及核磁氢谱对其成分进行鉴定,确证了iRGD-PEG-DPSE修饰成功。使用激光共聚焦显微镜对iRGD-囊泡-阿霉素进行了三荧光成像(阿霉素的自发荧光、iRGD-PEG-DPSE上的FITC荧光与标记在囊泡上的Dio荧光),荧光的共定位进一步验证了阿霉素被包裹在细胞表面囊泡中,同时也证明了iRGD-PEG-DPSE修饰成功。使用粒度仪和透射电子显微镜对iRGD-囊泡-阿霉素纳米颗粒的尺寸、形貌、zeta电位和成分等分别进行了检测,发现空载囊泡、囊泡-阿霉素和iRGD-囊泡-阿霉素的平均粒径分别为342 nm、396 nm和459 nm,并且iRGD-囊泡-阿霉素的衍射图出现结晶相。药物释放实验中,通过高效液相色谱的测定证明iRGD-囊泡-阿霉素的药物缓释效果要优于囊泡-阿霉素。体外细胞实验显示iRGD-囊泡-阿霉素能够更好地进入到肿瘤细胞(小鼠黑色素瘤细胞B16F10和人肝癌细胞HepG2)的细胞核中,且对多种肿瘤细胞(小鼠结肠癌细胞CT26.WT、小鼠肝癌细胞HEPA1-6、人肝癌细胞HLE、人肝癌细胞SMMC-7721、小鼠黑色素瘤细胞B16F10和人肝癌细胞Hep G2)具有杀伤作用。同时,可以抑制多种肿瘤细胞(Hep1-6、B16F10、Hep G2和SMMC-7721)的迁移。黑色素瘤小鼠模型动物实验显示,iRGD-囊泡-阿霉素不仅能有效地治疗小鼠体内肿瘤(肿瘤体积),而且还拥有比阿霉素更低的毒性,对心肝脾肺肾等器官影响更小。上述的体外、体内实验结果表明,分离纯化后得到的细胞表面囊泡能够成功负载靶向肽,并将阿霉素等抗肿瘤药物包裹在其中。靶向载药后的细胞表面囊泡(iRGD-囊泡-阿霉素)具有药物缓释能力,在提高阿霉素对肿瘤治疗效果的同时,还能降低对体内各个器官的毒副作用,证实了本课题最初的猜想。此外,我们还推测,靶向细胞表面囊泡未来可以作为一种广泛应用的药物载体系统,负载更多功能,从而诊断和治疗相应疾病(肿瘤或其他疾病),但这需要更进一步的实验来探索这些方面。
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