论文部分内容阅读
【研究背景】DPF2,又被称为REQ(Requiem),UBID4,ubi-d4,BAF45D。目前的研究资料显示,DPF2基因定位于小鼠Chr 19和人11q13.1,属于新型Krüppel型锌指蛋白d4蛋白家族,还属于SWI/SNF(switch/sucrose nonfermentable complex)复合物(在哺乳动物中又名BAF复合物)亚基之一。DPF2在哺乳动物组织中普遍表达,目前在神经及神经干细胞、肿瘤及肿瘤干细胞等的研究中占有一定的地位。DPF2已知在小鼠胚胎脑组织中表达,在中枢神经系统(CNS)发育和神经分化中起重要作用,但目前在成体鼠脑神经发生区中的表达、分布和作用尚无充分的研究。OCT4被公认是人干细胞的核心调控基因,本课题组发现DPF2可调节OCT4蛋白水平和核分布,验证了其可能在人干细胞的分化中起作用。鉴于DPF2在人干细胞中的表现,其在肿瘤干细胞中是否起类似作用,尚无文献报道。DPF2基因位于染色体11q13位置上,这一区域常与多种形式的肿瘤发生有密切关系。DPF2在神经胶质瘤中有表达,通过维持未分化的细胞状态可促成恶性神经胶质瘤表型;另外DPF2在白血病细胞扩增和自我更新起一定作用,并且抑制造血干/祖细胞和急性髓性白血病细胞的髓样分化,它的组蛋白结合在驱动髓样分化的转录程序中起着重要的调节作用。DPF2在实体肿瘤中的表达、分布和作用还有待深入研究。胰腺癌(Pancreatic cancer PC)是癌症高死亡率的主要原因之一,是一种预后不良的致命疾病。与大多数其他国家一样,中国胰腺癌的健康负担正在增加,年死亡率几乎与发病率相等。胰腺癌的早期诊断仍然很困难,因而寻找特异性的早期诊断和评估预后的标志物是降低胰腺癌死亡率、提高患者生活质量的关键。目前,临床上胰腺癌的筛查和诊断主要依靠一些肿瘤标志物检查,影像学以及影像学引导下的穿刺活检,这些远不能满足医患的期望,因此有必要寻找新的肿瘤标志物。【研究目的】本课题一方面通过采集C57成年小鼠脑组织,分辨鼠脑神经发生区解剖结构,研究DPF2在成年小鼠脑中神经发生区的表达规律。另一方面收集人胰腺癌标本,检测DPF2在人胰腺癌组织中的表达。再检测DPF2在人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中的表达情况。【研究方法】1.通过免疫组织化学和免疫荧光技术检测DPF2在成体小鼠脑中神经发生区的表达。2.通过细胞培养及细胞免疫荧光技术检测DPF2在人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中的表达情况。3.通过免疫组织化学和免疫荧光技术检测DPF2在人胰腺正常组织、良性肿瘤组织、肿瘤性变组织和癌组织中的表达。4.通过Western blot技术检测DPF2在在人胰腺正常组织、良性肿瘤组织、肿瘤性变组织和癌组织中的表达。【结果】1.DPF2在成年小鼠海马齿状回(DG)的颗粒下区(SGZ)中表达。2.DPF2和GFAP在成年小鼠海马齿状回(DG)的颗粒下区(SGZ)中共表达。3.DPF2和GFAP在成年小鼠脑室(LV)的室管膜细胞中共表达。4.DPF2优先在成年小鼠脑的成熟神经元中表达。5.DPF2在人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中高表达。6.HE染色鉴别人胰腺正常组织和胰腺癌组织,胰腺正常组织结构清晰,内外分泌部分界明显,在放大的图中胰岛、胰腺腺泡、小叶内导管结构完整,细胞极性良好,细胞及细胞核大小较均一;而胰腺癌组织中胰腺的正常组织结构异形,紊乱,消失,并伴随着结缔组织增生,细胞极性消失,细胞核分裂相增多,核大小不一。7.DPF2在人正常胰腺组织中有表达,DPF2免疫阳性率,内分泌部较外分泌部高;在人胰腺癌组织中,DPF2免疫阳性率明显高于正常胰腺组织。8.DPF2在正常胰腺组织中多表现为弱胞质定位,而在胰腺癌组织中多表现为核定位。【结论】DPF2在成年小鼠脑神经干细胞和神经元中表达丰富。DPF2在人胰腺癌组织中高表达,可能参与胰腺癌的发生发展。