补肾祛湿法对雌激素致肝内胆汁淤积症大鼠胆汁酸转运蛋白Ntcp表达的影响

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ICP的发病原因复杂多样,有许多学者认为其多因妊娠状态下,孕妇体内雌、孕激素水平升高,影响胆汁酸正常代谢,胆汁酸浓度升高而引起,严重可出现黄疸,肝酶升高,皮肤瘙痒等异常表现。祖国医学认为ICP属于“黄疸”病的范畴,根据辩证ICP属于“阳黄”。《金匮要略·黄疸病脉证并治》篇指出:“黄家所得,从湿得之”,湿邪既可从外感受,亦可自内而生。如外感湿热疫毒,为湿从外受;饮食劳倦或病后淤阻湿滞,属湿白内生。由于湿邪壅阻中焦,脾胃失健,肝气郁滞,疏泄不利,致胆汁输泄失常,胆液不循常道,外溢肌肤下注膀胱而发为目黄、肤黄、小便黄之证。由于妊娠期间体内气血聚集不外泄,滋养胎儿,因此造成了阴血不足,阳气偏盛的体质。若患者素来肝气不疏,郁结于胸,又因脾虚气化不足,聚而成湿;肝气疏泄失常,日久郁而生热,湿热郁结肝胆,胆汁过于排泄而形成黄疸。所以其治疗机制在于疏肝健脾,清热利湿。《景岳全书·黄疸》中说:阳黄证大多由于脾湿不运,郁而化热而成,须以清热,利通小便,热消而小便清,小便清而黄疸退。因此诸多医着倾向以茵陈蒿汤加减治疗ICP,且能收到显著的治疗效果。现代诸多医者根据前人的经验,加以发展,并以此为依据,用以系统地治疗和观察ICP患者,亦取得良好的临床疗效。且有现代医学研究表明,茵陈能增加胆汁的流出,从而促进胆红素排出体外,有显著的清利肝胆的作用;黄芩苷是黄芩的有效成分,其亦能促使胆红素的代谢加快,增加胆汁向体外排泄的速度。本实验依据中医“肝主疏泄”及“肾主生殖”的理论基础,采用由杜仲、茵陈、黄芩、山栀子、大黄、田基黄、茯苓、丹参、郁金、白鲜皮这十味中药配制成的补肾祛湿方,经过水煎灭菌后给予ICP患者口服。茵陈可清湿热,利肝胆;山栀子有清肝利胆及解毒之功效;大黄能利大便以泄郁热,减少胆红素淤积于肝胆。对TB、GC、ALT、AST的下降有非常显著的作用。对消退黄疸、减轻瘙痒以有明显作用,明显能减少产后出血、剖腹率及胎儿宫内窘迫等的发生。本实验的目的是用雌激素诱导大鼠及大鼠肝细胞形成胆汁淤积模型,观察补肾祛湿法方对模型的胆汁酸转运蛋白Ntcp表达的影响,明确补肾祛湿法方是否在mRNA水平具有调节胆汁酸运载有关的载体蛋白ntcp的表达的作用,明确补肾祛湿法方是否能够调节胆汁酸运载有关的载体蛋白ntcp的表达。探明补肾祛湿方治疗ICP可能的分子机制:可能是通过调节与胆汁酸运载排泄有关的主要载体蛋白转录、表达及分布的作用实现的。实验方法为使用1μmol/L的17-α乙炔雌二醇来诱导形成胆汁淤积模型后,使用补肾祛湿法方来干预处理,用实时定量PCR法及WB来测定Ntcp mRNA与蛋白表达水平。使用HE染色的方法将大鼠肝脏组织固定,制作成病理片,于镜下观察。实验结果是补肾祛湿法方可明显增加肝细胞Ntcp mRNA与蛋白表达水平,P<0.05。使用补肾祛湿法方药干预可不同程度减轻肝内胆汁淤积模型组大鼠的肝脏损伤。结论是补肾祛湿法方药治疗ICP的分子机制可能是通过提高肝脏组织内胆盐转运蛋白Ntcp信使核糖核酸与蛋白表达水平来实现的。通过增加胆汁酸转运蛋白的表达和分泌,有望成为ICP治疗的新方法。
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