目的：直肠癌是常见恶性肿瘤之一。行根治性切除术后，约50％左右的病人将发生复发或转移。以往认为大肠癌发生血行转移只在中晚期，主要是通过淋巴-静脉通道，而临床证明，即使在早期病变，甚至在发生淋巴结转移之前就可以发生血行转移，只不过血行转移在早期不易被发现。除了广受重视的淋巴转移途径外，肿瘤细胞在外周血中的微转移、手术切除前、后腹腔内残留的微量癌细胞或微小癌灶是导致术后腹膜播散、复发和转移的重要原因，在临床实际工作中，对腹膜返折以上的上段直肠癌患者往往能够重视对肿瘤细胞的血运转移及腹膜播散的判断及治疗，而对腹膜返折以下的下段直肠癌患者，则往往仅注重局部的广泛切除，淋巴结清扫，而容易忽略下段直肠癌仍可沿淋巴、血运等途径转移至腹膜、腹腔内器官，致使综合治疗欠缺，从而发生一些原本可能避免的术后腹膜播散、复发和转移，造成预后判断偏差较大；而如果对所有行肿瘤根治切除术的病人进行化疗，又可能使一些本不需要进行化疗的病人承受不必要的浪费和化疗药物的毒副作用；因此，准确判断下段直肠癌患者外周血、腹腔中是否已有肿瘤微转移，对于肿瘤的综合治疗、准确判断预后有着很重要的意义。传统的检测微转移方法，由于精确度较差，对临床指导意义有限。随着分子生物学技术的发展，特别是逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)技术的成熟和完善，准确检测外周血、腹腔内微转移肿瘤细胞已成为可能。本研究旨在通过CEA、CD44v作为靶目标，利用RT-PCR技术检测下段直肠癌外周血、腹腔冲洗液中的微小转移，从而 中文摘要探讨下段直肠癌外周血、腹腔冲洗液微转移的发生率，验证发现微转移的可能性，研究微转移与下段直肠癌各项临床生物行为的关系，为下段直肠癌患者术中、术后进行综合治疗提供理论依据。 方法：大肠癌细胞株SW480 在10％小牛血清－RPMI 640培养液下培养，用TfiZ＊法提取RNA，置于低温冰箱内保存；随机选取河北省医科大学附属第四医院外科2000年8月至2001年6月手术治疗的35例下段直肠癌患者，5例腹腔内良性病变患者，全部直肠癌病例均经病理证实，其中男性23例，女性12例，年龄26－80岁，平均 55岁，DukeS A期病人 11 例，DubS B期 13例，Dukes C期 9例，Dukes D期 2例。治疗（手术、放疗、化疗）前用0．sml肝素预处理的sml无菌注射器抽取肘前静脉血sml，用淋巴细胞分离液进行有核细胞的分离，用Trizol法提取RNA，低温冰箱保存以备进行RTICR检测；手术开始后马上取腹腔冲洗液100ml，其中 50ml做腹腔冲洗液细胞学中eritoneal lavagecytology，PLC）检查，50ml经离心后马上用Trzol法提取RNA，经凝胶电泳检测无降解后进行反转录，转录出的。DNA以p也ctin作为内参照标准，通过针对CEA、”“——“”““””——一‘“”””’“”‘”””’”“””””————”’””“——““”tCD44V的特异性引物进行扩增，对扩增产物通过凝胶扫描仪进行 DNA条带分析，从而利用 CEA、CD44v的表达 t判断肿瘤细胞的存在。低温保存的血液标本RNA、SW480细胞RNA亦用相类似的方法分别进行反转录以及。DNA的扩增及检测。 结果：为提高结果的特异性，RT干CR检测以CEA、CD44V InRNA均为阳性作为阳性标准，其余结果视为阴 2 中文摘要 性（以下同八35 例下段亘肠癌患者外周血中，CEA rnRNA、CD44V IYI，xiyA阳性 9例，占 25．7％，其中 A期 0例，B期3例（23．l％），C期5例（55．6％），D期1例 门0们，Dukes A期、B期与 C期相比，阳性率逐渐增 高，差异性明显，p司．020；RTICR检测腹腔冲洗液 CEA MA、CD44V InRNA阳性 13 例，占患者总数的 盯．l％，其中，A期1例（9．l％），B期4例（30．8％），C 期 6例（66．7％），D期 2例 （10％），Dukes A、B期 与 Dukes C、D期相比，阳性率逐渐增高，各期之间有明 显差异性，p司．0069；腹腔冲洗液细胞学检查阳性为5 例，占 14．3兄 RTICR检测阳性率明显忧于细胞学检 测，X‘－6＊，p＜0＊5，其中 RT－PCR检测出 A期、 B期患者阳性共5例，而细胞学检查仅检测出C期3 例，D期2例，未检出A期、B期患者阳性，但H者间 无统计学意义，X＼3．2，p叩刀5；外周血、腹腔冲洗液 中 CEA InRNA、CD44V rnRNA均为阳性者 6侈，占 17．1丸 阳性率随DllkeS分期增高而增高，但无统计学 意义，p＝0．063。 结论：下段直肠癌思者早期即可以在外周血、腹腔 中存在游离的癌细胞，也即存在看远处脏器转移、腹膜 播散的可能，在治疗此类病人过程中，不能因为肿瘤位 于腹膜外、远离腹?