论文部分内容阅读
黄皮属（Clausena Burm）植物种类较多，全世界约30余个种，其中11个种原产中国。黄皮为中国种，其栽培品种主要有大鸡心、选种大鸡心、长鸡心、郁南无核、独核甜、岐山甜、从城甜、红嘴鸡心、白糖鸡心、龙山无核、广西无核等。目前各地栽培的黄皮品种颇多，但不少同物异名或同名异物，由于地理分布的重叠和种类间的自然杂交，产生了多种中间过渡类型，使其种内品种的界线不清晰。本研究以89份黄皮种质为试验材料，利用RAPD技术对不同的黄皮种质进行分子水平的比较分析，通过实验设计及相应的统计分析做出聚类分析图，并应用流式细胞仪对部分种质进行染色体倍性分析，研究黄皮种质的遗传多样性和各种质相互之间的亲缘关系，为黄皮种质资源的起源和分类提供科学依据，也为今后更好地服务于黄皮遗传育种、优良品种鉴定以及黄皮种质资源保存等方面提供理论依据。主要研究结果如下：1、经过流式细胞仪的检测，白糖甜黄皮、早熟甜黄皮、早熟黄糖黄皮、鹰嘴黄皮、独核黄皮Ⅰ、独核黄皮Ⅱ、小果长鸡心黄皮均为二倍体，而广西无核黄皮、郁南无核黄皮为三倍体。2、利用改良的CTAB法提取DNA，质量和浓度采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计测定。OD260／OD280在1.7-1.9之间，较纯，可用于RAPD-PCR扩增。3、确定了黄皮的RAPD反应体系为：1.0 U Taq DNA聚合酶、2.5 mmol／L Mg2+、0.5μmol／L随机引物、50 ng模板DNA、0.20 mmol／L dNTPs，剩下的用ddH2O来补充。确定了适合黄皮的RAPD反应扩增程序为：94℃预变性3 min，94℃变性45 s，36℃退火45 s，72℃延伸1 min，38个循环；72℃后延伸7 min，4℃保存。4、从80个10碱基随机引物中筛选出18个扩增谱带清晰且稳定的引物，用这些引物对89份种质进行扩增，均具有多态性，共扩增出156条带，其中102条具有多态性，多态性比例为65.4％。Shannon多样性信息指数（Ⅰ）为0.6677，基因多样性（Ht）为0.4751。5、对89份黄皮种质进行了RAPD扩增，根据相似系数进行了聚类分析，依相似系数0.821的水平，可以将其分为4大类，具体情况如下：Ⅰ类：早熟甜黄皮、迟熟甜黄皮、广西无核、广西杂交黄皮、大叶长鸡心等，主要是广东、广西的54份种质；Ⅱ类：琼1号～14号黄皮、揭阳无核、龙山无核、广西圆皮、阳山鸡心，主要是海南省种质；Ⅲ类：郁南无核Ⅰ、从城黄皮Ⅲ、大鸡心Ⅰ、选种大鸡心、鸡心黄皮Ⅳ、广西小果鸡心、郁南无核Ⅱ、广西鸡心、从城黄皮Ⅰ、从城黄皮Ⅱ；Ⅳ类：鸡心黄皮Ⅵ、酸黄皮、鸡心黄皮Ⅷ、鸡心黄皮Ⅶ、塔下酸黄皮。