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中药柴胡是伞形科植物柴胡（Bupleurum chinense DC.）或狭叶柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.）的干燥根,常用于解表清热等疾病。柴胡皂苷（saikosaponins,SS）是中药柴胡的主要有效成分,现行版中国药典将柴胡皂苷a（saikosaponin,SSa）和柴胡皂苷d（saikosaponin,SSd）的总量作为柴胡的质控指标。中草药需炮制后方可入药。有学者对目前常见的柴胡炮制品研究发现,其SSa和SSd的含量均有不同程度的下降。SSa和SSd属于柴胡原生皂苷,其结构中含有环氧醚键,在酸性或受热的情况下发生断裂,转化成柴胡次生皂苷,即柴胡皂苷b1（saikosaponin b1,SSb1）和柴胡皂苷b2（saikosaponin b2,SSb2）,碱性环境可有效避免这种转化。本论文基于该原理设计柴胡碱法炮制工艺,探讨碱法炮制对中药柴胡中柴胡皂苷类成分含量的影响。柴胡皂苷为柴胡主要活性成分,具有抗炎、抗癌和保护肝脏等药理作用。其中SSa、SSd、SSb1和SSb2在抗炎方面一直备受关注。本论文拟以脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠巨噬细胞（RAW264.7）炎症模型为体外抗炎活性评价模型,通过碱柴胡提取物对白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）、肿瘤细胞坏死因子（tumor necrosis factor,TNF-α）和白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）等3个炎症因子释放量的抑制作用研究,探讨碱柴胡的抗炎活性,并应用细胞膜固相色谱法结合高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）-光电二极管阵列检测器（diode array detector,DAD）双波长法筛选碱柴胡提取物中的抗炎活性成分。目的:HPLC-DAD双波长法检测碱柴胡中柴胡皂苷含量的变化,探讨碱法炮制对中药柴胡中柴胡皂苷含量的影响,优选柴胡碱法炮制最佳工艺;采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）评价碱柴胡的体外抗炎活性,并通过细胞膜固相色谱法结合HPLC-DAD双波长法筛选碱柴胡提取物中的抗炎活性成分。方法:1.分别净制围场县柴胡（Bupleurum from Weichang country,WCB）、滦平县柴胡（Bupleurum from Luanping country,LPB）和丰宁县柴胡（Bupleurum from Fengning country,FNB）等三个产地柴胡,按照不同浓度的碳酸氢钠液体辅料（药材与辅料的质量比分别为:100:2、100:4、100:6）分别制备碱制围场县柴胡（JWCB-1、JWCB-2和JWCB-3）、碱制滦平县柴胡（JLPB-1、JLPB-2和JLPB-3）和碱制丰宁县柴胡（JFNB-1、JFNB-2和JFNB-3）等9种碱柴胡炮制品。采用HPLC-DAD双波长法测定生品柴胡与碱柴胡的醇提物与水提物中柴胡皂苷含量的变化,判断炮制过程中辅料用量对碱柴胡中柴胡皂苷含量的影响。2.选取炮制后柴胡原生皂苷含量最高的柴胡药材,设计L9（34）正交试验,以辅料比例、炮制时间、炮制温度和浸润时间为影响因素,以柴胡原生皂苷（primary saikosaponins,SSp）、柴胡次生皂苷（secondary saikosaponins,SSs）和柴胡总皂苷（total saikosaponins,SSt）含量的综合评分为考察指标,分别优选柴胡原生皂苷含量最高和柴胡次生皂苷含量最高的最佳碱法炮制工艺。3.按照最佳碱法炮制工艺,分别制备碱柴胡1（柴胡原生皂苷含量最高）和碱柴胡2（柴胡次生皂苷含量最高）,并分别制备碱柴胡1、碱柴胡2和生品柴胡的醇提物与水提物6种供试药物,以地塞米松（Dexamethasone,DEX）为阳性对照,进行体外抗炎活性检测。将传代三次以上的RAW264.7细胞接种于96孔细胞培养板中,置于37℃、5%CO2培养箱中培养24 h。取出96孔板,弃去上清液,每孔同时加入LPS及含不同浓度供试药物的培养基,继续培养24 h后取上清液,通过ELISA检测上清液中1L-1β、TNF-α和1L-6释放量,计算抑制率。运用SPSS21.0统计分析软件计算半数抑制浓度（median inhibition concentration,IC50）,探讨各供试药物的体外抗炎活性。4.选择柴胡原生皂苷含量最高的碱柴胡1的醇提物,与RAW264.7炎症细胞模型结合,通过细胞膜固相色谱法结合HPLC-DAD双波长法筛选碱柴胡提取物中的抗炎活性成分。结果:1.辅料用量为100:6时,碱柴胡SSp含量相较于生品柴胡提高最多:水提物中,JWCB的SSp含量增加了158.9%,JLPB的SSp含量增加了83.6%,JFNB的SSp含量增加了41.9%;醇提物中,JWCB的SSp含量增加了211.8%,JLPB的SSp含量增加了50.2%,JFNB的SSp含量增加了80.3%。辅料用量为100:2时,碱柴胡SSs含量相较于生品柴胡提升最大:水提物中,JWCB的SSs含量增加了66.3%,JLPB的SSs含量增加6.1%,JFNB的SSs含量则减少64.9%;醇提物中,JWCB的SSs含量增加约105倍,JLPB的SSs含量增加约500倍,JFNB的SSs含量增加约161倍。2.炮制后柴胡原生皂苷含量最高的药材为围场县柴胡。正交试验结果显示,以柴胡原生皂苷含量最高为考查指标时,碱柴胡的最佳炮制工艺条件为:辅料比例100:4、炮制时间6 min、炮制温度125℃、浸润时间2 h;以柴胡次生皂苷含量最高为考查指标时,碱柴胡的最佳炮制工艺条件为:辅料比例100:2、炮制时间8 min、炮制温度225℃、浸润时间2 h。3.与正常组比较,模型组细胞上清液中炎性因子IL-1β、TNF-α和IL-6释放量均显著提高,表明炎症模型诱导成功,结果具有统计学意义（P＜0.05）。加药组与模型组比较,碱柴胡1、碱柴胡2、生品柴胡的醇提物和水提物等6种供试药物,以及阳性对照药DEX对IL-1β、TNF-α和IL-6的释放量均有抑制作用。IC50值分别为:IL-1β（20.90±1.44μg/ml、37.086±2.22μg/ml、40.15±1.70μg/ml、41.35±0.12μg/ml、43.78±2.43μg/ml、45.93±1.87μg/ml、3.102±0.45μg/ml）;TNF-α（116.51±0.31μg/ml、122.31±2.56μg/ml、158.33±1.10μg/ml、161.28±2.77μg/ml、177.35±2.37μg/ml、170.23±1.46μg/ml、18.83±0.56μg/ml）;IL-6（124.82±1.39μg/ml、129.31±0.66μg/ml、169.13±1.44μg/ml、173.26±2.34μg/ml、189.11±3.21μg/ml、190.67±1.27μg/ml、13.79±1.98μg/ml）。上述结果具有统计学意义（P＜0.05）。4.HPLC结果显示,碱柴胡1的醇提物与RAW264.7炎症细胞模型相结合的抗炎活性成分为柴胡皂苷a和柴胡皂苷d。结论:1.碱法炮制可以提高柴胡药材中柴胡皂苷的含量,且碱柴胡中柴胡原生皂苷的含量与柴胡次生皂苷的含量均与炮制过程中辅料用量有关:辅料用量增加时,碱柴胡中柴胡原生皂苷含量升高;辅料用量减少时,碱柴胡中柴胡次生皂苷含量升高。以柴胡皂苷a和d的含量为评价指标,碱法炮制对围场县柴胡的原生皂苷含量提高最多。2.正交试验优选的碱柴胡最佳炮制工艺操作简便,稳定可靠。3.初步的体外活性试验结果表明,碱柴胡具有体外抗炎活性,且主要含原生皂苷的碱柴胡1,其醇提物及水提物的抗炎活性明显优于生品柴胡,而主要含次生皂苷的碱柴胡2,其醇提物及水提物的抗炎活性略优于生品柴胡。提示碱法炮制柴胡可有效提高柴胡药材的抗炎活性。4.细胞膜固相色谱法结合HPLC-DAD双波长法可以快速有效的筛选碱柴胡提取物中的抗炎活性成分,且与文献报道的柴胡主要抗炎活性成分为柴胡皂苷a和柴胡皂苷d相一致。本论文从炮制工艺入手,探讨了碱法炮制对柴胡中柴胡皂苷类成分含量的影响,并初步评价了碱柴胡的体外抗炎活性,相关研究成果可以为柴胡药材的临床应用提供一种新的技术手段。