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目的: 探讨基质蛋白Fibulin-5与眼眶IgG4相关性疾病纤维化、炎症、硬化的关系。 方法: 选取2014年3月至2016年6月在解放军第474医院收治的患者因眼眶IgG4相关性疾病(IgG4-related disease、IgG4-RD)(眼眶泪腺肿物摘除术中采集)的泪腺组织标本20例20眼(IgG4-ROD组),收集同期的20例20眼正常的泪腺组织标本(眼眶开放性粉碎性骨折清创术中采集)作为对照组。所有患者术前均未接受免疫和化学治疗,且在年龄方面具有可比性(P>0.05)。在获得医院伦理委员会同意并取得患者的知情同意后,在术中所有组织均在行眼眶泪腺肿物摘除中留取。把泪腺组织标本分为大小均为约0.3cm×0.3cm×0.3cm三块,生理盐水充分冲洗干净。取一块组织放入4%多聚甲醛固定24h,然后取出放入自动组织脱水机,随后用石蜡包埋,制成蜡块备用,另外两块放入锡箔纸包裹和装有Trizol EP管中,放入-80℃冰箱保存备用。对经-80℃冰箱冻存的标本采用实时荧光定量PCR检测Fibulin-5及mRAN表达和采用Western blot法检测Fibulin-5及蛋白表达,数据采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析,数据资料经Shapiro-Wilk检验呈正态分布,结果进行t检验,均数±标准差(-X±s)表示,组间均数经Levenne检验,以P<0.05定为有显著性差异。对经甲醛固定的标本采用免疫组织化学两步法检测Fibulin-5及蛋白的表达,其表达情况根据细胞染色面积和染色强度进行综合评分,所得结果采用Fisher确切概率法,相关性检验采用Sperman相关性分析法,以P<0.05定为有显著性差异。 结果: ⑴实时荧光定量PCR检测:眼眶IgG4相关性疾病与正常泪腺的患者相比,眼眶IgG4相关性疾病泪腺组织中Fibulin-5mRNA较正常泪腺明显增高。IgG4-ROD组中Fibulin-5mRNA的表达水平为3.69±1.72,而对照组中1.69±0.45,依据P<0.05的检验水准,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。⑵Western印迹法检测:Fibulin-5蛋白与Fibulin-5mRNA表达变化趋势较为一致。眼眶IgG4相关性疾病与正常泪腺的患者相比,眼眶IgG4相关性疾病泪腺组织中Fibulin-5蛋白较正常泪腺明显增高。IgG4-ROD组中Fibulin-5蛋白的表达为0.55±0.12,而对照组中Fibulin-5蛋白表达为0.19±0.11,按照P<0.05的检验水准,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。⑶免疫组织化学染色检测:Fibulin-5蛋白主要分布于细胞胞浆,阳性染色为黄色或棕黄色呈束状弥漫分布。免疫组化结果显示,IgG4-ROD组中泪腺细胞紊乱、部分破坏,染色为黄色、棕黄色的纤维化细胞排列紊乱,对照组中泪腺腺管规则,细胞规则排列,核染蓝色。IgG4-ROD组中Fibulin-5蛋白阳性率80%(16/20),对照组中Fibulin-5蛋白阳性率22.5%(9/40),按照P<0.05的检验水准,两组比较差异有统计学意义,IgG4-ROD组Fibulin-5蛋白的阳性表达显著高于对照组。 结论: 在Fibulin-5mRNA和蛋白水平的检测结果中均显示,眼眶IgG4相关性疾病与正常泪腺的患者相比,眼眶IgG4相关性疾病泪腺组织中Fibulin-5mRNA和蛋白表达较正常泪腺显著升高。