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目的:采用单纯烟雾暴露方法成功建立COPD大鼠模型后,对COPD大鼠模型进行多索茶碱、布地奈德及其联合两种药物等药物干预处理,观察多索茶碱对COPD大鼠模型糖皮质激素敏感性的改善情况,并探讨多索茶碱处理后COPD大鼠模型肺组织HDAC2表达及活性的改变与糖皮质激素敏感性增强的关系。方法:1、建立COPD大鼠模型:根据随机数值表将实验大鼠分为两组:烟雾暴露组、对照组,将烟雾暴露组大鼠放置在自制玻璃箱中进行烟雾暴露,同时将对照组大鼠放在另一玻璃染毒箱中呼吸空气。烟雾暴露组大鼠分别于8、10、12周随机抽取4只大鼠进行肺功能测定、取血、留取肺组织及收集支气管肺泡灌洗液,动态观察评价COPD大鼠模型。2、COPD大鼠模型药物干预处理:将建立成功的COPD大鼠模型随机分为两大组八小组,包括烟雾暴露16周组:烟雾暴露+生理盐水(16CE)、烟雾暴露+多索茶碱(16CE+D)、烟雾暴露+布地奈德(16CE+B)、烟雾暴露+布地奈德(16CE+B+D)、烟雾暴露+多索茶碱+布地奈德(16CE+B+D);烟雾暴露20周组:烟雾暴露+生理盐水(20CE)、烟雾暴露+多索茶碱(20CE+D)、烟雾暴露+布地奈德(20CE+B)、烟雾暴露+布地奈德+多索茶碱(20CE+B+D)。CE+B组在烟雾暴露前半小时进行雾化吸入激素治疗,在密闭箱内雾化吸入布地奈德2mg/4ml,30min,1次/天;CE+D组在烟雾暴露前半小时进行口服多索茶碱治疗,多索茶碱灌胃17.3mg/kg,2次/天。烟雾暴露16周组、烟雾暴露20周组分别在16周、20周进行肺功能测定、取血、留取肺组织、收集支气管肺泡灌洗液等处理,肺组织进行HE染色病理形态观察及形态定量分析,支气管肺泡灌洗液细胞Wright染色后进行炎症细胞计数及分类,血清和支气管肺泡灌洗液上清采用ELISA法测定IL-8、TNF-α水平,并采用Westernblot法测定肺组织蛋白的HDAC2、P-PI3K、PI3K、pAkt、Akt等5种蛋白的表达水平,HDAC2活性试剂盒测定肺组织HDAC2的活性。结果:1、COPD大鼠模型的建立:肺组织病理形态学分析发现烟雾暴露12周大鼠出现了肺气肿与气道非特异性炎症等组织病理学特征,且大鼠肺功能指标示FEV0.3下降、气道阻力增高、肺动态顺应性下降,表明有气流阻塞存在。与对照组对比,烟雾暴露12周组大鼠HDAC2表达下降且活性降低,且血清和BALF中TNF-α、IL-8水平降低。2、COPD大鼠模型的实验处理:?肺组织病理形态学分析:16周、20周布地奈德组与同时间的模型组对比,无明显改善仅肺组织炎症细胞浸润减少,MLI稍降低(p>0.05)、MAN升高(p<0.05);多索茶碱组与同时间的模型组相比,其炎症细胞浸润程度显著减低,MLI降低、MAN升高(p<0.05);多索茶碱+布地奈德组与同时间的模型组对比,肺组织破坏程度明显改善,MLI降低、MAN升高(p<0.05)。?肺功能测定:多索茶碱组、布地奈德组、多索茶碱+布地奈德组与模型组对比,FEV0.3、FEV0.3/FVC均有不同程度的提高(p<0.05)。?支气管肺泡灌洗液炎症细胞计数:多索茶碱+布地奈德组与同时间模型组比较,BALF总细胞计数减低(p<0.05)且以中性粒细胞减低为主。(4)肺组织HDAC2表达及活性测定:多索茶碱组、多索茶碱+布地奈德组与同时间模型组对比,通过Westernblot法测定的HADC2灰对值比较有不同程度的升高(p<0.05),HDAC2的活性测定值也有一定程度的升高(p<0.05),而布地奈德组HDAC2的表达和活性测定并无明显改善。(5)肺组织P-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白的表达:各组大鼠PI3K、Akt灰度值比较并无明显差异,与同时间的模型组比较,多索茶碱组、多索茶碱+布地奈德组大鼠肺组织的P-PI3K、p-Akt蛋白灰度值均有不同程度的降低(p<0.05)。(6)血清和支气管肺泡灌洗液中IL-8、TNF-α的分泌水平:与同时间的模型组比较,多索茶碱组、多索茶碱+布地奈德组大鼠血清和BALF中的IL-8、TNF-α通过ELISA测出的值均降低,而布地奈德组并无明显改变。结论:1、单纯烟雾暴露12周能够成功复制COPD动物模型,且随着烟雾暴露时间的延长,COPD模型大鼠肺组织炎症及肺气肿程度加重。2、在使用激素的基础上加用多索茶碱,大鼠肺组织p-PI3K、pAkt蛋白含量减少,HDAC2表达和活性增高,表明多索茶碱能够通过影响HDAC2逆转COPD模型大鼠对糖皮质激素的抵抗。