弯曲菌(Campylobacter)和沙门菌(Salmonella)是全球范围内重要的人兽共患病原菌,广泛存在于人类、宠物、畜禽和各种食品原料等,对人类健康造成巨大危害。而与宠物的亲密接触被认为是人类感染弯曲菌和沙门菌的重要来源。因此,加强对宠物群体弯曲菌和沙门菌的监测和预防,明晰不同源菌株间的传播途径,对于人弯曲菌病和沙门菌病的防控有重要意义。本研究的主要目的为:(1)调查扬州市宠物以及人源、禽源的弯曲菌和沙门菌的分布状况和流行特点,并追踪调查部分宠物家庭,探究宠物家庭中弯曲菌和沙门菌在人和宠物间的流行。(2)对不同来源分离株进行MLST分型研究,分析宠物与其它来源弯曲菌和沙门菌的分布特征,明晰不同宿主间的传播规律,并结合PubMLST数据库中国际菌株的资料,比较国内外弯曲菌主要流行的克隆群。一、扬州市宠物及其它来源弯曲菌和沙门菌的流行病学调查自2015年7月至2016年9月期间,于扬州某动物医院随机采集就诊宠物直肠棉拭子607份,采集病禽的肝、肠样品97份;于扬州市A医院收集腹泻人群送检粪便样品204份;于活禽市场和3个主要的农贸市场等采集活禽泄殖腔棉拭子样品、肉鸡胴体表面擦拭样品和环境样品共354份;追踪25户宠物家庭,采集宠物、人及环境样品共333份。参照国标方法,对上述1595份样品进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌,以及沙门菌的检测和分离鉴定。弯曲菌检测结果显示,动物医院采集的宠物样品中分离到25株空肠弯曲菌和8株结肠弯曲菌,阳性率分别为4.1%和1.3%;分类统计结果显示,本研究中临床表现腹泻症状的宠物弯曲菌阳性率显著高于无腹泻症状的宠物(P<0.05);幼年宠物(1岁以下)弯曲菌检出率显著高于成年宠物(P<0.05);而不同性别的宠物间的弯曲菌检出率无明显差异(P>0.05)。医院腹泻人群样品中分离到空肠弯曲菌11株,阳性率为5.4%;结肠弯曲菌5株,阳性率为2.5%。禽源样品中,采集于动物医院畜禽门诊的病禽内脏样品中共分离到16株空肠弯曲菌和29株结肠弯曲菌,阳性率分别为16.5%和29.9%,其中10份样品为空肠弯曲菌和结肠弯曲菌混合感染,混合感染的比例为10.3%;采集于活禽市场的活禽肛拭样品中共分离到23株空肠弯曲菌和13株结肠弯曲菌,阳性率分别为15.6%和8.8%,未发现混合感染现象;采集于农贸市场的肉鸡胴体表面擦拭样品中共分离到37株空肠弯曲菌和48份结肠弯曲菌,阳性率分别为34.6%和44.8%,其中21份样品为空肠弯曲菌和结肠弯曲菌混合感染,混合感染比例为19.6%。沙门菌检测结果显示,动物医院宠物样品中共分离到15株沙门菌,阳性率为2.5%;其中503份犬肛拭样中,13株为沙门菌阳性,阳性率为2.6%;104份猫肛拭样中,分离到2株沙门菌,阳性率为1.9%。医院腹泻人群样品中共分离到11株沙门菌,阳性率为5.4%;分类统计结果显示女性的沙门菌阳性率高于男性,但差异不显著(P>0.05);年龄为14岁以下人群弯曲菌平均阳性率显著高于14岁以上人群(P<0.05)。采集于畜禽门诊、活禽市场及农贸市场中共计451份禽源样品中共检出31份沙门菌阳性,平均阳性率为6.9%。沙门菌血清型鉴定结果显示,宠物源沙门菌分离株所包含血清型种类最多,且分布较为分散,包括鼠伤寒、肠炎、德尔卑、伦敦沙门菌等国内常见的血清型,以及菲尔摩雷、因切帕克、达布沙门菌等国内罕见的血清型,不同来源分离株中优势血清型有所不同,但部分血清型呈交叉分布。25户宠物家庭中弯曲菌和沙门菌流行追踪调查,共检出弯曲菌阳性和沙门菌阳性的家庭各3户。其中一户宠物犬检出为结肠弯曲菌阳性的家庭中,同时在该犬经常活动的草地所采集的土壤样品中也检出结肠弯曲菌阳性。此外,1位临床表现健康的宠物饲养者被检出为空肠弯曲菌和鼠伤寒沙门菌混合感染。本研究所采集的共计1595份不同来源样品中,共有5份样品出现沙门菌和弯曲菌混合感染的现象,混合感染的比例为0.31%。结果显示存在弯曲菌和沙门菌共感染的情况,但共感染比例不高。二、基于MLST的不同源弯曲菌和沙门菌分离株流行特征分析为了进一步分析宠物与其它来源弯曲菌和沙门菌的流行特征,明晰宠物家庭中弯曲菌和沙门菌可能的传播途径,本研究选取7对管家基因aspA、glnA、gltA、glyA、pgm、tkt和uncA,对来自宠物源、人源和禽源的195株弯曲菌分离株进行MLST分型研究;选取7对管家基因aroC、dnaN、hemD、hisD、purE、sucA、thrA,对64株沙门菌分离株进行MLST分型研究。弯曲菌MLST分型结果显示,195株弯曲菌分离株分属于21种同源复合体和独特型,共包含107种ST型。其中共出现16种新序列型,包含空肠弯曲菌和结肠弯曲菌各9株。具有同源复合体的细菌占总细菌的85.6%,属于独特型的细菌占总细菌的14.4%。空肠弯曲菌的优势ST型为ST-5,优势同源复合体为ST-353,结肠弯曲菌的优势ST型为ST-830,属于ST-828同源复合体的分离株占结肠弯曲菌总数的92.6%。宠物源弯曲菌分离株共46株,被分为28种ST型,分属于11种同源复合体和独特型。三种来源菌株的优势同源复合体具有一致性,包含两种及两种以上来源菌株的同源复合体有11种,其中10种均含有宠物源菌株,宠物源弯曲菌与其它来源分离株所属主要同源复合体相似,表明宠物与其它来源的弯曲菌密切相关,宠物和禽肉食品源弯曲菌是人弯曲菌感染的主要来源之一。对弯曲菌阳性养宠家庭分离株的MLST分型结果显示,B家庭中从宠物犬和草地土壤分离到的结肠弯曲菌均属于序列型ST-830,犬源分离株与环境样品分离株关系密切。结果表明,在一个家庭中,宠物犬感染弯曲菌后,可随粪便排出至环境中,从而引起人的感染。将本研究中宠物源空肠弯曲菌MLST分型结果与PubMLST数据库中选取的130株空肠弯曲菌国际菌株分型结果进行比较,结果表明本研究宠物源弯曲菌分型所获得的同源复合体与数据库中常见的同源复合体基本相同,但其中仅有4种序列型与选取的国际菌株所属序列型相同,即ST-22,ST-45,ST-48和ST-13,其余序列型均不同,表明空肠弯曲菌的分布还具有地域性特征。对不同年份宠物源弯曲菌STs的分布情况进行分析,研究发现,不同年份间弯曲菌分离株中优势ST型有所不同,年份相差越远,属于同一 ST型分离株越少。沙门菌MLST结果显示,64株不同来源沙门菌分成了 21种不同的ST型,其中包含分离株数量最多的ST型为ST 314,占总数的28.1%。其余主要的ST型为ST 292(12.5%)、ST 34(12.5%)和ST 155(6.3%),其他ST型呈散在零星分布。不同来源沙门菌的ST型与血清型之间存在着密切的对应关系,大部分的血清型与ST型间存在着一一对应的关系。三种来源菌株中存在部分ST型呈交叉分布,如ST14,ST34,和ST155。