基于体外吸收模型探讨木犀草素对头孢噻呋肠吸收的影响及其机制研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:taobaowang1312
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随着养殖规模的不断扩大,细菌性疾病给养鸭业造成的损失不容忽视。头孢噻呋作为首个动物专用的第三代头孢菌素类抗生素,因具有广谱高效的抗菌活性,是治疗鸭细菌性疾病的常用药物。据报道,天然黄酮类化合物能够影响药物在肠道的转运从而促进其吸收。但尚未见有关木犀草素对头孢噻呋在鸭的肠吸收影响的相关报道。本研究通过建立鸭的外翻肠囊模型和Caco-2单层细胞模型探究黄酮类化合物木犀草素对头孢噻呋肠吸收的影响及其机制,将为兽医临床联合应用头孢噻呋与木犀草素防治鸭的细菌性疾病提供理论依据。本研究通过建立体外模型-鸭外翻肠囊模型,利用HPLC法检测各组肠囊液中头孢噻呋的浓度,计算和分析头孢噻呋的表观渗透系数(Papp)、吸收率和吸收速率等参数,考察了木犀草素对头孢噻呋肠吸收的影响。结果显示,木犀草素能够显著升高头孢噻呋的Papp、吸收率和吸收速率,这表明木犀草素能够促进头孢噻呋在鸭肠道的吸收,且随着木犀草素浓度的增加其促进作用增强。通过建立离体细胞模型—Caco-2单层细胞模型进一步考察了头孢噻呋的转运机制及木犀草素对头孢噻呋跨膜转运的影响。结果显示,头孢噻呋的Papp为1.065×10-6 cm/s,其外排比率(ER)为1.96,木犀草素能够显著降低头孢噻呋的Papp和ER,且MRP2抑制剂丙磺舒能够显著降低头孢噻呋在Caco-2细胞中的Papp和累积转运量。这表明头孢噻呋在肠道以主动转运的方式被吸收,吸收程度中等,为不完全吸收物质;MRP2转运蛋白参与头孢噻呋的外排,且木犀草素能促进头孢噻呋在Caco-2细胞的转运;该结果与头孢噻呋在鸭肠中的试验结果一致。采用实时荧光定量PCR和Western Blot技术分别检测了头孢噻呋的相关转运蛋白MRP2和紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1、ZO-1编码基因的m RNA表达量和蛋白表达量。结果显示,木犀草素能够显著下调MRP2、Occludin、Claudin-1、ZO-1的m RNA和蛋白的表达量(p<0.05),说明木犀草素能够使鸭肠组织和Caco-2细胞中头孢噻呋相关转运蛋白和紧密连接蛋白的转录水平和蛋白表达水平显著降低,从而促进头孢噻呋的肠吸收并抑制其外排。本研究表明头孢噻呋在鸭肠道以主动转运的方式被吸收,吸收程度中等,为不完全吸收物质,且存在外排现象;木犀草素可通过下调头孢噻呋相关转运蛋白和紧密连接蛋白的基因转录和翻译,从而抑制头孢噻呋的外排,促进其在肠道的转运,将为兽医临床联合应用头孢噻呋与木犀草素防治动物的细菌性疾病提供理论依据。
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