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MUC1是Mucins黏蛋白家族的重要成员,因正常组织MUC1与肿瘤组织的差异使其成为理想的抗肿瘤靶分子。近年,国内外研制的以MUC1为靶点的疫苗包括糖疫苗、DNA疫苗、蛋白或多肽疫苗以及树突状细胞疫苗,部分已进入临床试验阶段。但在多种疫苗研究中发现蛋白或多肽疫苗具有良好的应用前景。但蛋白疫苗面临的主要问题是免疫原性弱、难以诱导细胞免疫应答等缺点。因此,如何提高疫苗的免疫原性,是当今肿瘤疫苗研究亟待需要解决的问题。本研究室为了提高MUC1的免疫原性将MUC1与大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(Maltose binding protein,MBP)蛋白进行融合,制备了MUC1-MBP融合蛋白。初步研究发现MUC1-MBP融合蛋白能显著抑制小鼠Lewis肺癌LLC1和人乳腺癌MCF-7细胞的生长。本研究从特异性免疫和非特异性免疫应答两方面进一步深入探讨MUC1-MBP融合蛋白免疫调节活性,构建稳定转染MUC1的B16黑色素瘤细胞(B16-MUC1),利用B16-MUC1和不表达MUC1的B16-neo细胞建立动物模型,研究MUC1-MBP融合蛋白诱导的免疫应答在抗肿瘤中的作用。取免疫小鼠的血清分析MUC1特异性抗体;取免疫小鼠的脾细胞在体外用MUC1合成多肽刺激5～6天后,采用MTS检测特异性淋巴细胞增殖;采用ELISA检测特异性淋巴细胞分泌细胞因子;采用LDH方法检测特异性CTL对靶细胞B16-MUC1和B16-neo细胞的杀伤。研究结果表明MUC1-MBP融合蛋白只能诱导特异性体液免疫应答不能诱导细胞免疫应答; MUC1-MBP融合蛋白在BCG佐剂作用下,不仅能诱导产生MUC1特异性体液免疫应答,也能诱导MUC1特异性Th1和CTL应答。通过免疫小鼠脾细胞中NK细胞、巨噬细胞和树突状细胞(Dendritic cell,DC)分析结果表明,MBP蛋白能诱导NK细胞和巨噬细胞活化,不能诱导DC活化;BCG既能诱导NK细胞和巨噬细胞活化,也能诱导DC活化;MUC1与MBP偶联通过NK细胞和巨噬细胞活化增加MUC1的免疫原性;MUC1-MBP+BCG通过BCG增强了MUC1特异性细胞免疫应答。肿瘤预防实验和治疗实验结果表明,MUC1-MBP及MUC1-MBP+BCG无论对B16-MUC1和B16-neo细胞在早期均有抑制作用;在肿瘤后期只有MUC1-MBP+BCG组对B16-MUC1肿瘤细胞有显著抑制作用,而对B16-neo肿瘤细胞无抑制作用。上述结果提示MUC1-MBP+BCG诱导的非特异性免疫和特异性免疫均参与抗肿瘤作用,尤其在肿瘤晚期特异性细胞免疫应答发挥重要作用。