该研究分为两部分:一.牙龈卟啉单胞菌临床分离株prtH基因序列分析该研究旨在分析P.g菌prtH基因的遗传多态性,了解P.g菌遗传变异与其对牙周致病作用的相关性.以PCR反应扩增从不同牙周炎患者口腔中分离的牙龈卟啉单胞菌的prtH基因的两个不同区域,检测临床茵株中是否存在特异性的prtH基因片段及其敏感性,同时采用斑点杂交法,以生物素标记prtH基因全长探针,来确认所获得的PCR扩增产物确为prtH基因序列.通过对PCR产物进行Alul限制性酶切和DNA测序分析,了解prtH基因的变异情况.二.prtH基因水解酶活性区域多肽prtHN的克隆、表达及纯化RgpA基因由四个区域组成:信号序列,氨基端的前体肽,催化蛋白酶区域,和碳端粘附区域,其中前体肽的作用是保证基因产物的稳定性,粘附区域的作用是血细胞凝集.prtH基因编码的蛋白属于Rgp蛋白酶,是牙周炎早期和活动期的重要毒力因子.prtH基因全长3kb,具有特异性水解C3补体功能.该研究采用DNAsis2.5软件分析prtH基因蛋白水解酶活性中心核苷酸序列,用PCR的方法将其亚克隆到pQE30表达载体上,用BamHI和HindⅢ进行限制性酶切,并将阳性重组质粒进行测序分析,利用BLAST软件,与GenBank中RgpA中的prtH等位基因序列比对其同源性达99.8﹪.经IPTG诱导表达融合蛋白pQE30-PrtHN.用镍柱亲和层析对重组蛋白进行分离纯化,然后进行SDS-PAGE分析.所得融合蛋白约14kDa,以包涵体形式表达.并以实验室制备的兔抗茵体抗体和抗膜泡抗体进行Western blot检测,证明了蛋白的免疫原性和特异性.