论文部分内容阅读
第一部分Chk1/2蛋白在胶质瘤和正常脑组织中的分布及意义目的探讨Chk1、Chk2蛋白在胶质瘤和正常对照组织中的分布特点,以评价Chk1、Chk2作为胶质瘤治疗靶点的可行性。方法应用免疫组织化学SABC法检测Chk1、Chk2蛋白在80例胶质瘤和18例正常脑组织中的表达,并结合病理特点进行分析。结果Chk1、Chk2蛋白在各类型胶质瘤和正常脑组织中均表达,Chk1蛋白在胶质瘤中的阳性表达水平明显高于正常脑组织(P=0.027);Chk2蛋白在胶质瘤和正常脑组织中的阳性表达水平无显著性差异(P=0.173)。Chk1、Chk2蛋白表达水平在高级别胶质瘤(WHOⅢ～Ⅳ级)和低级别胶质瘤(WHOⅠ～Ⅱ级)中无明显差异(P=0.301、0.135)。Chk1和Chk2蛋白在胶质瘤中的表达呈正相关(r=0.795,P<0.001)。结论Chk1在胶质瘤中高表达,是胶质瘤的特异性表达分子,可以作为胶质瘤治疗的靶点,Chk2与Chk1在胶质瘤中的表达呈正相关,联合灭活Chk1、Chk2来增强胶质瘤治疗敏感性非常重要。第二部分放射线照射引起胶质瘤细胞细胞周期和凋亡的动力学特点及其对Chk1/2蛋白表达的影响目的观察非同步化的U251细胞株对放射线所表现的细胞周期和凋亡的变化以及放射线对Chk1、Chk2蛋白表达的影响。方法以不同剂量的放射线处理非同步化的U251细胞株,流式细胞仪检测处理后不同时间细胞周期和凋亡变化,流式细胞仪和Western blot法检测照射后Chk1、Chk2蛋白表达量。结果非同步化的U251细胞株经放射线处理后可引起G2/M期阻滞,细胞周期阻滞呈照射剂量依赖性增强,而细胞凋亡均发生于细胞周期阻滞解除后,其强度与细胞周期激活的程度成反比。照射后不影响Chk1、Chk2蛋白水平的表达。结论放射线处理非同步化的U251细胞株可成功地建立G2/M期阻滞模型,但对Chk1、Chk2蛋白水平表达无影响。第三部分Chk1/2反义寡核苷酸增强胶质瘤细胞放疗后凋亡敏感性目的观察Chk1/2反义寡核苷酸(ASON)转染后,对U251细胞株中Chk1和Chk2表达以及照射后细胞周期改变的影响。方法用脂质体、Chkl/2的正义、反义寡核苷酸复合物对U251细胞株进行Chkl/2单转染和Chkl/Chk2共转染,测定其转染效率。以放射线照射,用流式细胞仪分别测定其细胞周期和凋亡率变化,比较Chkl/2单转染和Chkl/2共转染,Chkl/2正义链和反义链凋亡敏感性的不同。采用Western Blot检测Chk1和Chk2蛋白表达、Real time PCR检测其mRNA表达。结果单独转染Chk1、Chk2或联合转染Chk1/Chk2反义寡核苷酸均能显著增强放射线诱导的细胞凋亡,消除细胞周期阻滞;Western Blot和Real time PCR结果表明转染Chk1、Chk2反义寡核苷酸后Chk1、Chk2蛋白表达和mRNA明显降低。结论反义核酸技术无论单独或联合灭活Chk1、Chk2基因均可消除细胞周期阻滞,显著增强放疗诱导的U251细胞凋亡。