根据甜蛋白莫标林的氨基酸序列,选择毕赤氏酵母偏爱的密码子,用化学合成法合成单链莫奈林基因片段,并拼接成完整基因.克隆后序列分析表明,合成单链莫标林基因与设计的保持一致.将单链莫标林基因装载到大肠杆菌质粒pUC118、pBSKS+和毕赤氏酵母整合型质粒pPIC9K,构建了毕赤氏酵母单链莫奈林基因表达载体pPCI9K/SCM.利用BglII酶酶切构建好的表达载体pPCI9K/SCM,形成线性化的表达单元,经电转化、RDB缺陷培养和G418抗性平板筛选后,获得了其表达单元整合在酵母基因组中的转化重组子(即重组菌株),其中有3个抗G418的水平达到4mg/ml;转化重组子得到PCR的验证.通过表达测试,得到一个表达水平较高的重组子.经诱导表达,SDS-PAGE显示在约11~12KD处有一条明显的蛋白条带.表达产物纯化后,SDS-PAGE检测发现有两条带,且分子量较大的约为较小的两倍产品;这个结果提示,表达产物在某些溶剂中可能以两种形式——单体和二聚体存在.通过摇瓶诱导发酵,表达产物的含量占发酵上清液总蛋白的46.9﹪,其浓度为2.12mg/ml,产量为11.07mg/g湿菌.经等电薄层凝胶电泳检测,表达产物的pI约为9.4.