人IL-2复制缺陷型重组腺病毒的构建和鉴定

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:s04325102
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本研究的目的是构建含人白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,为研究其体内外的抗肿瘤作用打下基础。 方法:将hIL-2DNA片段与载体pDNR-Dual-CMV融合,转化大肠杆菌DH5α。得到重组质粒(pDNR-Dual-hIL-2),经鉴定正确,将pDNR-Dual-hIL-2质粒与pLP-Adeno-x-CMV质粒重组得到重组载体pLP-Adeno-hIL-2,再次转化大肠杆菌DH5α,挑取正确克隆,大量扩增,提取质粒。将此质粒经PacI酶切后与LipofectamineTM2000转染HEK293细胞,产生含人IL-2的复制缺限型重组腺病毒(AdhIL-2)。 结果:pLP-Adeno-hIL-2重组载体经PCR、酶切鉴定结果与预期相符,所得重组病毒滴度达到5×107PFU/ml。 结论:成功构建了hIL-2的复制缺陷型重组腺病毒,并得到较高的病毒滴度。
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