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当前,体细胞核移植技术已日趋完善,但效率较低,其内在根源可能与卵母细胞对供体核的不完全重编程有关,表现为DNA甲基化水平和组蛋白乙酰化水平的异常。本研究旨在通过使用5-aza-dc和TSA对水牛核移植供体及卵母细胞受体进行不同的处理,观察其对核移植重构胚发育率的影响,以揭示DNA甲基化和组蛋白乙酰化对重构胚的作用,从而探索出一条提高核移植效率的新途径。
本研究一共分为如下四个试验:试验l,以0.03 u mol/L的5-aza-de、0.05 u mol/L的TSA、以及不同组合5-aza-dc+TSA(0.03 u mol/L+0.05 U mol/L,0.015μ mol/L+0.05 U mol/L,0.03μ mol/L+0.025μ mol/L,0.015 u mol/L+0.025 u mol/L)分别对水牛成纤维供体细胞进行处理,处理时间分别为72h、12h和12h,观察核移植后重构胚发育情况,试验设空白对照。结果发现,联合处理组合0.03μ mol/L5-aza-dc+0.05 u mol/LTSA与对照组以及其它处理组相比,核移植重构胚的囊胚率显著提高(P<0.05)。试验2,以0.03 u mol/L的5-aza-dc、0.05 u mol/L的TSA以及0.03 u mol/L5-aza-dc+0.05μ mol/LTSA分别对水牛核移植重构胚进行处理72h、12h、12h。试验发现,采用0.03μ mol/L5-aza-dc+0.05u mol/LTSA处理核移植重构胚12h,其重构胚的囊胚率显著高于对照组(P<0.01)。试验3,以0.03 u mol/L5-aza-dc、0.05 u mol/L TSA以及0.03 u mol/L5-aza-dc+0.05μ mol/LTSA分别对水牛核移植供体处理72h、12h和12h,并分别对随后的重构胚处理72h、12h和12h。研究发现:0.05μ mol/L TSA组核移植重构胚的分裂率和囊胚率均与对照组差异显著(P<0.05);0.03μ mol/L5-aza-dc+0.05μ mol/LTSA组核移植重构胚的分裂率与对照组差异不显著(P>0.05),但其囊胚率与对照组差异极显著(P<0.01)。另外,0.05 u mol/L TSA组和0.03μ mol/L5-aza-dc+0.05μ mol/LTSA组的核移植重构胚的分裂率、囊胚率之间均无显著差异(P>0.05)。试验4,在上述实验的结果上,采用0.03μ mol/L5-aza-dc+0.05 u mol/LTSA对水牛转EGFP核移植供体处理12h,随后对重构胚再处理12h。试验发现,该处理组与对照组的分裂率和囊胚率均无显著差异(P>0.05)。
以上结果表明:采用0.03μ mol/L5-aza-dc+0.05 u mol/LTSA对核移植供体及重构胚分别进行12h处理,可极显著提高重构胚的囊胚率,可用于水牛转基因克隆胚胎的生产。