【摘 要】
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研究目的:应用已构建的rHSG-1重组复制缺陷型腺病毒(Ad5rHSG-1)转染培养的SHR主动脉VSMCs,观察rHSG-1对SHR主动脉VSMCs增殖的作用,并探讨可能的机制.研究方法:1. SHR大鼠胸主
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研究目的:应用已构建的rHSG-1重组复制缺陷型腺病毒(Ad5rHSG-1)转染培养的SHR主动脉VSMCs,观察rHSG-1对SHR主动脉VSMCs增殖的作用,并探讨可能的机制.研究方法:1. SHR大鼠胸主动脉VSMCs原代培养和鉴定.2.PCR法鉴定已构建的重组复制缺陷型腺病毒Ad5rHSG-1.3.Ad5rHSG-1转染SHR的VSMCs最佳MOI的测定.4.Ad5rHSG-1转染SHR的VSMCs后,WesternBlot检测rHSG-1蛋白的表达.5.Ad5rHSG-1转染SHR的VSMCs后,用细胞计数、MTT检测和<3>H-TdR参入法观察rHSG-1对SHR的VSMCs增殖的抑制作用.6.Ad5rHSG-1转染SHR的VSMCs后,流式细胞仪观察rHSG-1对SHR的VSMCs细胞周期的影响.7.Ad5rHSG-1转染SHR的VSMCs后,Western Blot检测rHSG-1对细胞周期调控蛋白p27、p21和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.研究结果:1.α-平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)免疫组化鉴定SHR的VSMCs正确.2.PCR鉴定Ad5rHSG-1正确.3.当腺病毒用量在200MOI时,对SHR的VSMCs感染效率几乎达到100％.4.Western Blot检测到Ad5rHSG-1转染SHR的VSMCs后,有68KD大小的rHSG-1蛋白表达.5.Ad5rHSG-1转染SHR的VSMCs后,对细胞增殖有明显抑制作用,与对照组比较抑制率达到40％(P<0.01).6.Ad5rHSG-1转染SHR的VSMCs后,细胞周期阻滞于G<,0>/G<,1>期.7.Ad5rHSG-1转染SHR的VSMCs后,细胞周期调控蛋白p27、p21表达升高,PCNA表达降低.结论:rHSG-1基因可以抑制培养的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖,其作用可能是通过调节细胞周期调控蛋白p27、p21和PCNA的表达,抑制细胞内DNA合成,阻滞细胞进入细胞周期而实现的.
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