第一部分 丹参多酚酸盐对鸡胚绒毛尿囊膜模型的促血管新生作用 目的：丹参治疗冠心病历史悠久，作用明确，但尚未知其机理是否与血管新生有关。鸡胚绒毛尿囊膜模型是研究血管新生的有效模型，本研究观察丹参多酚酸盐对鸡胚尿囊膜模型的影响来考察丹参多酚酸盐是否有促血管新生作用。 方法：制作鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)促血管新生的模型，以生理盐水组为阴性对照，以bFGF为阳性对照，比较不同剂量丹参多酚酸盐组干预后，比较各组CAM血管生成的计数，来探讨丹参多酚酸盐是否有促血管生成作用。 结果：丹参多酚酸盐组新生血管的数目与生理盐水相比，明显增加，差别有显著统计学意义P＜0.01，但是达不到bFGF水平。 结论：丹参多酚酸盐能明显促进鸡胚绒毛尿囊模型新生血管的生成。 第二部分 丹参多酚酸盐对人血管内皮细胞增殖的影响 目的：血管内皮细胞的增殖是血管生成的重要环节，但丹参多酚酸盐是否能够促进血管生成从而有利于缺血心肌建立侧枝循环，尚未见报道。我们就丹参多酚酸盐对脐静脉内皮细胞株生长增殖的影响进行了体外研究，来探讨丹参多酚酸盐是否有促血管新生作用。 方法：分别采用MTT法、~3H-胸腺嘧啶核苷酸(~3H-TdR)掺入率法测定不同剂量的丹参多酚酸盐作用于人脐静脉内皮细胞时的增殖情况，并用流式细胞仪技术(FCM)检测其细胞周期，以生理盐水作为阴性对照，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为阳性对照，来了解丹参多酚酸盐对脐静脉内皮细胞增殖的影响。 结果：用丹参多酚酸盐刺激体外培养脐静脉内皮细胞株，会发生与bFGF作用相似的形态学改变。细胞增殖旺盛，生长曲线迅速上移，MTT吸光度增加，~3H-TdR掺入量升高，说明丹参多酚酸盐能刺激细胞增殖。丹参多酚酸盐的作用与浓度密切相关，从对细胞增殖促进率来看：丹参多酚酸盐小剂量组的促进率为t ～ 7．90见 中剂量组为对．07见 大剂量组为2．27儿 可见小剂量组对细胞增殖的促 进作用甚微，剂量增大则显著提高，但至大剂量组反而下降，这可能与浓度过 大时渗透压增大损害细胞膜抑制细胞增生所致。细胞周期的研究显示，丹参多 酚酸盐组G／；期细胞比例降低，S期细胞比例增高，由此推测丹参多酚酸盐促 进G。期细胞由静止状态进入GI活化状态后，继而又促进G；期细胞加速进入S 期进行DNA合成，意即真正提前进入增殖周期循环，从而促进脐静脉内皮细胞 的增殖。 结论：丹参多酚酸盐能明显促进内皮细胞增殖，与生理盐水比较，差异有显著 性；提示丹参多酚酸盐能促进血管生成。 电 第三部分 丹参多酚酸盐对人血管内皮细胞迁移的影响 目的：血管新生是一个复杂过程，单就内皮细胞而言主要有迁移、增殖和管腔 形成等几个步骤，因此，本研究就丹参多酚酸盐对单核细胞诱导的内皮细胞迁 移的影响进行探讨。 方法：我们用RT—PCR方法检测丹参多酚酸盐对单核细胞VEGF 和 bFGFmRNA的影响，用ELISA方法检测丹参多酚酸盐干预后单核细胞分泌的 VEGF和 bFGF水平，装配微孔滤膜培养小室进行单核细胞一内皮细胞联合培 养，显微镜下计数包括丹参多酚酸盐干预组在内的各组的穿过滤膜的内皮细胞 ＠数，比较迁移促进率，来了解丹参多酚酸盐对单核细胞诱导的内皮细胞迁移的 影 Illg。 结果：经丹参多酚酸盐处理THP—l 细胞24h后，与生理盐水对照组比较， ＊＊＊Fm RNRNA表达显著升高（o．sin咖1组P＜0刀5，linyml组P＜0刀1） bFGFmRNA表达在ling／ml组显著升高（P＜0刀5人丹参多酚酸盐干预各组THP —l细胞表达 VEGF均有上升，其中 0．smg／ml、ling／ml组上升有显著统计学意 义，分别为P＜0刀5和P＜0刀1。bF＊F虽有上升趋势，但无统计学意义（P＞0刀5）。 迁移实验结果是当下室无THP—l 细胞时，移行至膜下的内皮细胞很少。而当 下室有 THP—l 细胞时，移行至膜下的内皮细胞明显增加，经 0．25mg／ffil， 0．sing／ffil，ling／ml的丹参多酚酸盐处理24 ／J＼时后，内皮细胞的迁移数进一步 增加，均较对照组多，迁移促进率分别为 25％、43．75％、56．25％，其中 0．sing／ffil， lin旮ml丹参多酚酸盐组，与对照组比较，差异均有显著性，P＜0刀5。 ． 2I一t 一 结论：在0．smg／ml—ling／ml浓度的丹参多酚酸盐下，我们能观察其促进单核细 胞诱导的内皮细胞迁移。丹参多酚酸盐对培养的人单核细胞释放VEGF、bFGF 及表达其mRNA均有促进，说明该药可能是通过影响该两因子等环节发挥促血