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目的:本实验通过探讨不同的葡萄糖浓度下人牙髓细胞(Human dental pulp cells,HDPCs)增殖和氧化应激的变化,以探索糖尿病(Diabetes mellitus,DM)影响牙髓的发病机制。方法:1、体外提取并分离培养HDPCs,并进行鉴定。2、实验分组:将接种HDPCs分为四组:葡萄糖浓度为5.5 mmol/L设为低糖组,25 mmol/L设为正常组,50 mmol/L设为高糖组,与50mmol/L组渗透压相等,并与5.5 mmol/L组葡萄糖浓度相等设为高渗组。3、不同浓度葡萄糖培养HDPCs 1、3、5天后,使用CCK-8试剂盒检测其增殖情况,绘制生长曲线图。4、用2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2,7-dichlorofuorescin diacetate,DCFH-DA),一种活性氧(Reactive oxygen species,ROS)检测剂处理各实验组细胞,荧光显微镜观察HDPCs中的荧光强度,多功能酶标仪检测细胞内ROS含量。酶标仪法检测不同浓度葡萄糖处理后细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,四唑盐法(WST-1)检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力。5、用荧光探针JC-1孵育各实验组细胞,流式细胞术分析HDPCs线粒体膜电位(Mitochondrial transmembrane potential,MMP)的变化。结果:1、采用改良组织块法培养的牙髓细胞呈长梭形,生长良好。HDPCs抗角蛋白染色阴性,胞浆内未见染色,抗波形蛋白为阳性,胞浆内可见棕黄色阳性颗粒。2、与正常组比较,高浓度葡萄糖作用于牙髓细胞1、3、5天后,HDPCs的增殖缓慢,细胞活力较低,呈明显的抑制作用。3、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平在50 mM葡萄糖浓度下暴露72 h后显著升高,超氧化物歧化酶(SOD)活力降低。4、线粒体膜电位的检测表现为高糖组荧光值高于其他实验组,具有统计学差异(P<0.05)。结论:1、高浓度葡萄糖会降低牙髓细胞的活力,对细胞增殖呈明显的抑制作用。2、高糖环境能够造成HDPCs线粒体膜电位下降,ROS、MDA水平明显升高,SOD含量下降,诱导牙髓细胞氧化应激的产生。