多种病因引起的脉络膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）是导致患者中心视力丧失的重要原因之一。治疗CNV及相关疾病是目前眼科学研究领域的研究热点，很多学者都致力于寻找有效的治疗方法。目前主要的治疗方法包括：光动力学疗法（photodynamic therapy,PDT）,传统激光疗法，经瞳孔温热疗法,手术疗法，放射疗法，药物治疗及吲哚青绿介导的光栓疗法等。PDT由于选择性高、对周围组织损伤小、不损伤视力，较其它方法安全、有效，是目前较成熟的治疗CNV的方法。　　光敏剂是PDT的核心物质，新型光敏剂的研究一直是PDT的研究重点之一。PDT的提出、发展及应用都是随着光敏剂的发展而逐渐完善的。具有亲水性-亲脂性结构的酞菁类配合物是很有应用前景的靶向型光敏剂。负载硝基芳基苄醚树枝配体轴向取代硅(IV)酞菁聚合物纳米粒子（SiPc-n）是一种新型的国产光敏剂，引入的树枝状轴向取代基团能有效抑制酞菁聚集，有利于提高光敏活性，应用聚乙二醇单甲醚-乳酸-羟基乙酸共聚物（mPEG-PLGA）双亲性纳米粒对硅(IV)酞菁聚合物进行包裹，有效改善水溶性。　　本研究通过观察SiPc-n介导的PDT对脐静脉内皮细胞和视网膜色素上皮细胞的影响，以及对BN大鼠CNV的作用，评价SiPc-n治疗CNV的可行性和有效性，初步阐明作用机制，为SiPc-n的开发应用提供实验依据和理论基础。本文主要从以下几部分展开论述：　　第一部分 SiPc-n PDT对正常脐静脉内皮细胞（HUVEC）和视网膜色素上皮细胞（RPE）的影响　　目的：观察SiPc-n PDT后体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和人视网膜色素上皮细胞（RPE）增殖和凋亡的变化，探讨SiPc-n PDT引起细胞死亡可能的机制及对细胞功能的影响。　　方法：1.测定HUVEC和RPE内SiPc-n含量变化：HUVEC和RPE分别与含终浓度20ug/ml SiPc-n的培养液共孵育。间隔数小时收集一组细胞，洗涤、计数和超声破裂细胞，制备细胞裂解产物上清，应用荧光分光光度计检测并计算SiPc-n的含量，以此推断SiPc-n分别在HUVEC和RPE中的摄取和代谢变化规律。　　2.SiPc-n PDT对HUVEC和RPE细胞增殖的影响：细胞分为PDT组、光敏剂组、激光组和空白组，分别加入5-20μg/ml SiPc-n，应用2-20J/cm2半导体激光照射，CCK-8比色法、台盼兰拒染法观察SiPc-n PDT对HUVEC和RPE增殖的影响。　　3.SiPc-n PDT引起细胞死亡形式的检测：Hoechst33342染色法和透射电镜观察PDT前后细胞的形态学变化，激光共聚焦检测线粒体膜电位的变化，应用流式细胞仪检测细胞内活性氧产生的变化、结合Annexin V-PI双染法判断细胞死亡的形式。　　4.SiPc-n PDT对HUVEC和RPE功能影响的分析：荧光定量PCR检测SiPc-n PDT前后HUVEC和RPE细胞VEGFmRNA和PEDFmRNA表达的变化。　　结果：1.HUVEC及RPE细胞内的SiPc-n浓度变化存在差异：与SiPc-n共孵育时，HUVEC10h内SiPc-n含量达到峰值，RPE5h达高峰。SiPc-n比SiPc达峰时间提前，摄取量提高。　　2.SiPc-n可抑制HUVEC和RPE的增殖：SiPc-n-PDT可抑制HUVEC和RPE细胞增殖，抑制作用呈剂量-效应关系，在20μg/mlSiPc-n和10 J/cm2激光能量时活细胞数明显减少。　　3.SiPc-n可诱导HUVEC和RPE发生线粒体相关的细胞凋亡：Hoechst33342染色和透射电镜可见HUVEC和RPE细胞经SiPc-n PDT后，细胞形态出现凋亡的改变，随着时间延长，凋亡细胞逐渐增多；激光共聚焦检测SiPc-n PDT组的线粒体膜电位较对照组明显下降，差别达统计学意义；流式细胞仪检测SiPc-n PDT组较对照组活性氧产生增多，差别达统计学意义。流式细胞仪检测结合Annexin V-PI双染法显示SiPc-n PDT组细胞死亡以凋亡为主，且HUVEC细胞组凋亡数多于RPE细胞组。　　4.SiPc-n PDT可引起VEGFmRNA和PEDFmRNA表达量发生改变，平衡失调。　　结论：SiPc-n在特定波长激光的激发下可表现良好的光动力活性。SiPc-n PDT时可明显抑制HUVEC和RPE细胞增殖；SiPc-n-PDT主要诱导HUVEC和RPE细胞发生凋亡并导致血管生成相关基因表达改变。聚合物纳米载体可提高药物的靶向性和摄取率。　　第二部分 激光诱导BN大鼠CNV模型的建立和评估　　目的：观察倍频532nm激光诱导BN大鼠CNV模型的成模时间和变化规律，探讨适宜PDT治疗的时间点。　　方法：25只健康BN大鼠行倍频532nm激光眼底光凝，等分为5组，4只健康BN大鼠做为正常对照组，激光功率140 mw，光斑直径50μm，曝光时间100ms。分别于7d、14d、21d、28d、56d光凝后行荧光血管照影（FFA）、吲哚菁绿血管照影（ICGA）、眼底光学相干断层扫描（OCT）检查、光镜观察、免疫组织化学检查。　　结果：光凝后14d开始出现CNV，28d达高峰，成模率84％，FFA示典型圆盘状渗漏，ICGA可见CNV充盈，OCT、组织学检查均可见CNV形成。　　结论：倍频532nm激光光凝可成功诱导BN大鼠CNV模型，成模率高，成模时间短，持续时间长。21-28d可做为PDT治疗的时间点。　　第三部分 SiPc-n介导的光动力学疗法治疗BN大鼠脉络膜新生血管　　目的：观察不同剂量SiPc-n PDT对BN大鼠CNV的影响，探讨SiPc-n PDT治疗CNV的可行性。　　方法：光凝后28d，取有典型的CNV的大鼠21只，分为SiPc-n介导的PDT1组(注射3mg/m2SiPc-n+600mW/cm2激光照射83s)、2组：SiPc-n介导的PDT2组(注射6mg/m2SiPc-n+600mW/cm2激光照射83s)、3组：SiPc-n介导的 PDT3组(注射3mg/m2SiPc-n+600mW/cm2激光照射166s)、4组：SiPc-n介导的 PDT4组(注射6mg/m2SiPc-n+600mW/cm2激光照射166s)、5组：维替泊芬介导的PDT组（注射6mg/m2维替泊芬+激光照射83s）、6组：应用SiPc-n后不打激光组（注射6mg/m2SiPc-n）、7组：空白对照组。尾静脉注射光敏剂后20min后开始激光照射，所用参数：光斑直径2400μm，激光能量密度：50J/cm2，输出功率：600 mW/cm2，光照时间83s或166s。治疗后7d行眼底镜、FFA检查、OCT、光镜、免疫组化和电镜检查。　　结果：FFA显示各治疗参数的CNV闭合程度不同，随能量的增加和光敏剂剂量的增加而提高。光凝后1d，PDT组视网膜水肿，各组CNV荧光渗漏无改变；光凝后7d，维替泊芬组、注射6mg/m2SiPc-n+600mW/cm2激光照射166s组渗漏停止率高于其它组别，其余组CNV渗漏均无改变。　　结论：选择适当参数SiPc-n PDT可以有效封闭CNV。