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目的 建立一种体外分离和培养人骨髓间充质干细胞（Bone Marrow- derived Mesenchymal Stem Cells , BMSCs）的方法;探讨BMSCs在单层培养中向软骨细胞定向分化的条件，为软骨组织工程提供种子细胞。方法 分别采集3例志愿者骨髓各6ml，用Percoll细胞分离液分离，收集单个核细胞，在含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液中培养扩增，流式细胞仪分析BMSCs的表面标志。将培养第3代细胞分为4组：A组为对照组，B组为无血清诱导培养基组（含10ng/ml的rhTGF-β1、丙酮酸钠1mM、地塞米松10-7M、牛胰岛素6.25μg/ml、转铁蛋白6.25μg/ml的高糖DMEM培养液）；C组为含5%胎牛血清的诱导培养基组；D组为含10%胎牛血清的诱导培养基组。倒置显微镜下观察细胞生长状况，免疫组化检测Ⅱ型胶原分泌，原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达，甲苯胺蓝染色检测蛋白多糖的分泌，3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷（3H -TdR）掺入实验检测细胞的增殖情况。结果 经密度梯度离心后，活细胞比例在96%以上。贴壁后的细胞形态均一，由梭形向多角形转变，并一致表达CD9，而 CD34、CD38、CD45、CD61呈阴性。B、C组细胞在诱导培养7天后II型胶原免疫组化均为阳性，原位杂交可检测到II型胶原mRNA的表达，甲苯胺蓝染色阳性，而A、D两组分别为阴性和弱阳性。D组细胞增殖最强，而B组细胞最弱，四组细胞3H -TdR摄入量的大小顺序为D＞C＞A＞B。结论 密度梯度离心法是一种有效获取人骨髓间充质干细胞的方法，细胞在体外生长稳定，表型均一；10ng/ml的TGF-β1可诱导人骨髓间充质干细胞向软骨细胞方向分化，但在无血清培养基中无法有效的促进细胞的增殖；低浓度的胎牛血清（5%）和10ng/ml的TGF-β1联合作用既可促进人骨髓间充质干细胞的增殖，又可诱导其向软骨细胞方向分化，而高浓度胎牛血清仅对细胞的增殖有促进作用。