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抑郁症是一种常见的精神疾病,以持续性情绪低落为主要症状,是致残的主要原因之一。它的致残性不仅对个人,也对家庭和社会产生了巨大的影响。目前的一线抗抑郁治疗药物仍有治疗效果有限,起效时间滞后等缺点,且长期和频繁使用抗抑郁药还会带来许多副作用,包括但不限于体位性低血压、心血管疾病、胃肠道疾病、癫痫和骨折风险等。研究表明,针灸治疗抑郁症的方面效果显著,能有效缓解抑郁大鼠模型的抑郁状态。并且,针灸联合抗抑郁药物治疗抑郁症起效快,安全,耐受性好,该治疗组合比单独运用SSRI药物治疗能产生更好的治疗效果。基于电针治疗抑郁症的疗效优良,关于电针治疗抑郁症的机理研究较多,但其具体机制仍未完全阐明。本实验通过研究电针对海马tPA/BDNF通路相关分子的影响,探讨电针治疗抑郁症的机制,为电针治疗抑郁症的临床应用提供科学的理论依据。目的本研究旨在从tPA/BDNF通路角度深入探讨电针对慢性不可预见性应激(CUMS)抑郁模型大鼠的深层作用机制。方法1.动物分组将60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组和电针组。大鼠在实验前适应性饲养一周。2.模型干预除正常组外,其余组大鼠均进行28d不可预知温和刺激造模。造模大鼠全部孤养,28d随机接受7种不同的应激刺激,包括4℃冷水游泳5min,昼夜颠倒24h,禁食24h.禁水24h,夹尾3min,潮湿环境24h,束缚3h。相邻两天刺激不相同,且每种刺激出现不少于4次。3.处理方法造模前后测量体重并进行旷场试验与糖水消耗试验。电针组每天造模后1h对大鼠“百会”、“印堂”进行20min电针干预,参数为2Hz,2mA。“百会”穴针尖朝后,“印堂”穴针尖朝前,两针柄之间用脱脂棉球相隔以防短路;氟西汀组每天造模后1h用生理盐水将氟西汀稀释至1ml,以2mg/kg的用量进行灌胃。4.指标及检测方法HE染色观察海马CA3区神经元形态及数量变化.Western blot和Real-time PCR观察电针对大鼠海马 tPA/BDNF 通路 BDNF、BDNF mRNA、TrkB、tPA、tPA mRNA、proBDNF、p75NTR等相关分子的影响。结果1.体重及行为学CUMS造模前四组间大鼠体重均无显著性差异(P>0.05)。4 周的CUMS造模可导致体重的显著降低(P<0.01);而电针(P<0.01)和氟西汀(P<0.05)能显著改善造模导致的体重减少;与药物组体重相比,电针组大鼠体重存在显著性差异(P<0.05)。与正常组大鼠相比,抑郁模型组大鼠糖水消耗试验中的糖水消耗率明显降低(P<0.01).电针(P<0.01)或氟西汀(P<0.01)能改善这种情况;而电针组和氟西汀两组之间没有显著差异(P>0.05)。在旷场试验中,与正常组相比,接受28天应激刺激后的模型组大鼠的水平运动次数及垂直运动次数均显著减少(P<0.01);电针组的水平运动次数以及垂直运动次数与模型组相比显著升高(P<0.01);另外,与模型组相比,氟西汀组的水平运动次数显著升高(P<0.01),而垂直运动次数则无明显差异(P>0.05)。2.病理学HE光镜下观察海马CA3区结果显示,正常组大鼠海马CA3区神经元细胞排列规则,细胞层次丰富,细胞膜与细胞质形态结构完整结,细胞核圆且大。模型组大鼠海马神经元细胞层数明显减少.结构紊乱,神经元细胞萎缩、数目减少、形态不规则,细胞间隙变大,核仁不明显,部分神经元呈空泡样变。电针组与氟西汀组大鼠海马细胞排列较模型组规则,层次较丰富,细胞排列整齐紧密,核仁清晰。3.各组大鼠海马BDNF、TrkB、tPA、proBDNF、p75NTR蛋白的表达Western blot结果显示,模型组大鼠海马BDNF,TrkB,tPA的相对表达量与正常组相比显著降低(P<0.01),电针(P<0.01)和氟西汀(P<0.05)能逆转它们的降低趋势。四组大鼠海马中proBDNF的相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组相比,模型组和氟西汀组海马的P75NTR蛋白表达量差异有统计学意义(p<0.05),存在升高趋势。4.各组大鼠海马 BDNF mRNA、tPA mRNA含量Real-time PCR结果显示,模型组大鼠海马BDNF mRNA(P<0.01)和tPA mRNA(P<0.05)含量与正常组相比降低。与模型组相比,电针与氟西汀能增加BDNF mRNA(P<0.01)的含量,然而电针与氟西汀均没有提高tPA mRNA(P>0.05)的含量。结论1.行为学试验结果显示,旷场水平得分与垂直得分及糖水偏爱率都明显提高。说明电针和氟西汀都能明显改善模型大鼠抑郁状态,显著提高了抑郁模型大鼠自主活动能力和空间探索能力,降低了抑郁模型大鼠快感缺失水平。且电针组抗抑郁效果要好于氟西汀组。2.电针组大鼠海马 BDNF、BDNF mRNA、tPA蛋白含量较模型组高,海马 proBDNF含量与模型组相比差异无统计学意义。说明电针可能是通过增加海马tPA的含量从而促进proBDNF 向 BDN F转化,起到抗抑郁作用。3.电针提高了海马BDNF、trkB蛋白含量,而proBDNF、p75NTR蛋白含量有降低趋势。根据本研究结果,电针抗抑郁的过程中,可能更大程度上是通过提高海马 BDNF、trkB蛋白含量维持海马神经细胞存活从而起到抗抑郁的效果。总的来说,电针可改善CUMS模型大鼠的抑郁状态,其机制可能与海马中tPA/BDNF通路有关。