双向电泳与质谱相结合筛选鸡脑组织中TOCP诱发OPIDN相关蛋白

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fengyuguohou2009
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目的:以“有机磷化合物和PMSF的双受体影响”假说为理论依据,通过双向电泳和质谱分析,筛选OPIDN诱发相关差异表达蛋白,并探讨TOCP的OPIDN作用机制。方法:罗曼鹤母鸡24只,1 0月龄,体重1.5-2.0kg,适应性喂养一周后用于试验。根据“双受体影响假说”分别将鸡随机分为4组,即对照组、TOCP组、PMSF组和PMSF+TOCP组。TOCP用量为1000 mg/kg,经灌胃一次给予、PMSF用量为40 mg/kg,经皮下注射一次给予。PMSF+TOCP组为先给PMSF,24小时后再给TOCP。染毒后7天处死动物,取各组动物脑组织。并且测定四组鸡大脑双向电泳表达图谱。在双向电泳表达图谱筛选差异明显的点进行质谱鉴定。双向电泳原始文件用imagemaster2Dplatinum软件搜索相应的数据库,蛋白表达差异2倍以上的点视为差异显著。将差异表达蛋白点的肽质量指纹谱和分子量、等电点的数据输入计算机,用MASCOT软件的MS MS离子方式在蛋白质数据库中搜索,找寻与之匹配的相关蛋白质,同时查询其功能。肽质量指纹谱容许误差0.3Da,分子量容许误差±20%。结果:在对照组和1OOOmg/kgTOCP染毒组的鸡大脑总蛋白中分别检测到1332和1295个蛋白点,能相互匹配的占78.31%。PMSF和PMSF+TOCP两组分别检测到1295和1294个蛋白点,且与对照组的匹配率均大于75%。与对照组相比,TOCP染毒组鸡脑中具有显著差异表达的蛋白点有236个,其中差异达到4倍以上的蛋白点数有32个。根据“双受体影响假说”筛选出其中差异最明显的4个点进行质谱鉴定,鉴定结果为1612点主要为谷氨酰胺(GS),等电点为8.26,分子量为31.66kD。1171点为热休克蛋白70(HSP-70),等电点为7.57,分子量为41.81kD。1457点为乳酸脱氢酶(LDH-B),等电点为7.71,分子量为35.58 kD。1067点荷马蛋白(homer-1b),等电点为5.54,分子量为44.40 kD。且这四个蛋白与对照组比,TOCP组均表达下调(P≤0.05);其余两组与对照组比表达均没有显著变化。结论:通过“有机磷化合物和PMSF的双受体影响假说”从TOCP暴露组中共筛选出236个蛋白点可能与迟发性神经毒性相关,其中homer、谷氨酰胺、谷氨酰胺酶这三个蛋白可能是OPIDN发生过程中的关键蛋白。
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