杜仲质量控制研究

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目的:杜仲是我国特有名贵中药材,药用历史悠久,具有补肝肾、降血压和血糖、调血脂、抗菌和抗氧化等药理活性。但是由于产地和生长环境各异,加工不规范,市面上杜仲质量参差不齐。《中国药典》以性状、薄层色谱及松脂素二葡萄糖苷含量作为其质量控制方法,不够全面。本文针对以上问题,以56批来自13个省份的杜仲药材为研究对象,采用斜率校正“一测多评法”、近红外光谱定量分析法和化学指纹图谱法对杜仲进行研究,为提高杜仲质量控制标准提供基础。。方法:1.在HPLC法含量测定基础上,以绿原酸(CHA)为对照品,计算京尼平苷酸(GPA)、京尼平苷(GP)、松脂素二葡萄糖苷(PDG)的斜率相对校正因子,建立测定杜仲多种活性成分的斜率校正“一测多评法”。2.利用化学计量学方法对杜仲近红外光谱进行预处理,通过偏最小二乘(PLS)回归法将PDG和GPA的HPLC含量数据与处理后的近红外光谱数据关联,建立快速测定杜仲中PDG和GPA含量的近红外光谱定量模型。3.建立了全国杜仲药材的标准HPLC指纹图谱和张家界杜仲药材的标准指纹图谱,结合化学计量学方法对杜仲样本进行分析。结果:1.,通过散点图法比较斜率校正“一测多评法”与外标法两种结果相关性,验证斜率校正“一测多评法”的准确性,结果显示两种方法测得56批杜仲样本中GPA、GP、PDG的含量结果的相关系数均大于0.99。2.通过内部交互验证法对模型验证,结果得到PDG校正集的相关系数为0.9615,内部交互验证均方差为0.0015;GPA校正集的相关系数为0.9583,内部交互验证均方差为0.0064。随机抽样进行外部验证,所得模型预测值与HPLC的测量值没有明显差异。3.采用化学计量学对杜仲样本进行分析,所有样本相似度为0.76-0.98;PCA结果图上湖北、云南、河北样本分别聚集较好,湖南张家界样本单独聚为一类;PLS-LDA判别分析显示拟合正确率和总预测正确率均为100%,并通过CASR筛选出6个张家界杜仲标志性化合物。结论:本研究建立的斜率校正“一测多评法”廉价、准确性高,可用于杜仲中GPA、CHA、GP、PDG活性成分含量测定;所建立的杜仲GPA和PDG近红外光谱定量模型预测准确度高,能实现对杜仲中这两种活性成分便捷、快速地含量测定;杜仲指纹图谱能用于阐述不同产地、不同生长环境的杜仲药材整体化学成分的差异,湖南张家界杜仲药材存在本身特征性,其中GPA、CHA、GP和其他3种未知化合物为其标志性化合物,为张家界杜仲申报国家地理标志保护产品提供了理论依据。本文通过斜率校正“一测多评法”和近红外光谱定量法对活性成分含量的精确测定与整体模糊信息的化学指纹图谱相结合,从而全面科学地控制与评价杜仲药材质量。
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