论文部分内容阅读
背景神经炎症在缺血性脑卒中过程里起重要作用。Toll样受体4(Toll-likereceptor,TLR4)信号通路可调节小胶质细胞促炎因子释放,在脑卒中方面提供了新的治疗方向。近年发现,调节线粒体动力学可实现神经保护作用,但其与小胶质细胞相关的机制尚未明确。夏佛塔苷作为黄酮类化合物,具有抗炎活性。目前已证实夏佛塔苷可减轻脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导肺损伤小鼠模型的肺部炎症,但其在氧糖剥夺(Oxygen-glucosedeprivation,OGD)诱导的神经炎症和线粒体动力学中的作用机制尚不清楚。
目的基于TLR4/Myd88/Drp1通路,探讨夏佛塔苷对OGD诱导的神经炎症和线粒体动力学的调节作用。
方法以BV2小胶质细胞为研究对象,分为6组:对照组、OGD组(终浓度0.1μg/mL)、夏佛塔苷(终浓度为0.01μM)加OGD组、夏佛塔苷(终浓度为0.1μM)加OGD组、夏佛塔苷(终浓度为1μM)加OGD组、TAK-242(终浓度为1μM)加OGD组。qRT-PCR检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、Myd88的表达影响。ELISA检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α的影响。WesternBlotting检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、Myd88的蛋白表达影响。免疫荧光染色检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞TLR4和Myd88的表达影响。WesternBlotting检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞总体Drp1和p-Drp1(Ser616)的表达影响。WesternBlotting检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞线粒体中Drp1和p-Drp1(Ser616)的表达影响。免疫荧光染色检测Drp1的线粒体转位。Mito-tracker染色方法观察BV2小胶质细胞线粒体形状及线粒体分裂水平。
结果
1夏佛塔苷可抑制经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌和mRNA表达(P<0.05;P<0.01)。
2夏佛塔苷可抑制经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达(P<0.05;P<0.01)。
3夏佛塔苷可抑制经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞TLR4的蛋白和mRNA表达(P<0.05;P<0.01)。
4夏佛塔苷可抑制经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞Myd88的蛋白和mRNA表达(P<0.05;P<0.01)。
5夏佛塔苷可减少经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞中Drp1的表达、磷酸化、转位和线粒体分裂(P<0.05;P<0.01)。
结论夏佛塔苷能够通过抑制TLR4/Myd88/Drp1通路减少线粒体分裂改善OGD诱导的神经炎症。
目的基于TLR4/Myd88/Drp1通路,探讨夏佛塔苷对OGD诱导的神经炎症和线粒体动力学的调节作用。
方法以BV2小胶质细胞为研究对象,分为6组:对照组、OGD组(终浓度0.1μg/mL)、夏佛塔苷(终浓度为0.01μM)加OGD组、夏佛塔苷(终浓度为0.1μM)加OGD组、夏佛塔苷(终浓度为1μM)加OGD组、TAK-242(终浓度为1μM)加OGD组。qRT-PCR检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、Myd88的表达影响。ELISA检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α的影响。WesternBlotting检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、Myd88的蛋白表达影响。免疫荧光染色检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞TLR4和Myd88的表达影响。WesternBlotting检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞总体Drp1和p-Drp1(Ser616)的表达影响。WesternBlotting检测夏佛塔苷对经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞线粒体中Drp1和p-Drp1(Ser616)的表达影响。免疫荧光染色检测Drp1的线粒体转位。Mito-tracker染色方法观察BV2小胶质细胞线粒体形状及线粒体分裂水平。
结果
1夏佛塔苷可抑制经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌和mRNA表达(P<0.05;P<0.01)。
2夏佛塔苷可抑制经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达(P<0.05;P<0.01)。
3夏佛塔苷可抑制经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞TLR4的蛋白和mRNA表达(P<0.05;P<0.01)。
4夏佛塔苷可抑制经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞Myd88的蛋白和mRNA表达(P<0.05;P<0.01)。
5夏佛塔苷可减少经OGD处理4h后的BV2小胶质细胞中Drp1的表达、磷酸化、转位和线粒体分裂(P<0.05;P<0.01)。
结论夏佛塔苷能够通过抑制TLR4/Myd88/Drp1通路减少线粒体分裂改善OGD诱导的神经炎症。