论文部分内容阅读
猪乙型脑炎和猪圆环病毒病是危害养猪业的重要传染性疾病，而且乙型脑炎还严重危害人类身体健康。目前还没有特效药治疗这两种疾病，疫苗预防是控制这两种疾病的有效手段。为了有效预防这两种疾病，本研究对本实验室分离鉴定的乙型脑炎病毒LS株在Vero细胞上的培养特性和免疫原性等进行了研究，并利用乙型脑炎病毒LS株和本实验室分离鉴定的猪圆环病毒2型HNYY株研制了猪乙型脑炎-猪圆环病毒病二联油乳剂灭活苗。具体研究结果如下：1.乙型脑炎病毒LS株的理化特性及其在Vero细胞上的增殖动态研究对乙型脑炎LS株的理化特性及其在Vero细胞上的增殖规律进行研究。将乙型脑炎病毒LS株以106.2TCID50的接种量接种在100mL细胞瓶铺满单层的Vero细胞，在病毒接种后每隔8h收集细胞上清液和混悬液并测定病毒效价。结果显示，病毒理化特性研究发现乙型脑炎病毒LS株对乙醚、胰蛋白酶、热（56℃）、酸（pH5）敏感，反复冻融，对病毒活力影响轻微；在接种后56h细胞上清液和混悬液的病毒效价达到高峰，分别为106.0TCID50/0.1mL、106.5TCID50/0.1mL。2.乙型脑炎病毒罗山株的免疫原性研究将乙型脑炎病毒LS株接种Vero细胞增殖，收获的病毒液经甲醛灭活后，以矿物油为佐剂制备出油乳剂灭活苗。将疫苗免疫小鼠和猪，分别免疫2次，间隔2周，免疫后采集血清，检测血清中抗乙型脑炎病毒抗体水平。结果显示：试制疫苗免疫小鼠能够诱导产生平均1:64的乙型脑炎乳胶凝集试验（LAT）抗体，免疫猪能够诱导猪产生平均1:200的乙型脑炎血凝抑制（HI）抗体，抗体水平比市售猪乙型脑炎灭活疫苗高。证明了乙型脑炎病毒LS株具有良好的免疫原性。3.猪乙型脑炎-猪圆环病毒病二联灭活疫苗的研究利用本实验分离鉴定的乙型脑炎病毒LS株和猪圆环病毒2型HNYY株分别在Vero细胞和PK-15细胞上增殖出较高效价的病毒液，然后通过浓缩，甲醛灭活，等量混合，加入油佐剂乳化，制备出猪乙型脑炎-猪圆环病毒病二联油乳剂灭活疫苗。并对疫苗进行了物理性状检验、无菌检验、安全性检验和小鼠免疫试验。结果显示试制二联苗剂型稳定，对小鼠安全可靠，免疫后能够诱导小鼠产生相应的两种抗体，抗乙型脑炎病毒乳胶凝集抗体平均高达1:37.33，抗猪圆环病毒2型ELISA抗体平均高达1:3200，抗体水平与相应单苗相当。证明两种抗原之间没有相互干扰作用，相互间不影响彼此在动物体内的免疫应答。