【摘 要】
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以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基,Sepharose-4B为载体的亲和层析从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)匀浆液中分离出了蚯蚓纤溶酶全组分,用DEAE-Cellulose-52离子交换层析法和制备电泳
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以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基,Sepharose-4B为载体的亲和层析从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)匀浆液中分离出了蚯蚓纤溶酶全组分,用DEAE-Cellulose-52离子交换层析法和制备电泳法分离纯化了蚯蚓纤溶酶各单组分(其中EfP-Ⅲ-1,EfP-Ⅲ-2为待研究目的组分),ConA转移印迹和LCA,AAL点印迹法证明EfP-Ⅲ-1,EfP-Ⅲ-2的寡糖链都含有甘露糖和核心岩藻糖结构,EfP-Ⅲ-1,EfP-Ⅲ-2经三氟甲基磺酸(TFMS)去糖基化后失去了抵抗胰蛋白酶水解的能力。分别以TFMS去糖基化前后的蚯蚓纤溶酶全组分为抗原免疫家兔,通过酶联免疫法和转移印迹法证明两种抗原的免疫原性和免疫反应性均没有明显的差异。以小分子可逆抑制剂苯甲脒抑制EfP-Ⅲ-1,EfP-Ⅲ-2的活性,通过纤维蛋白平板法测得苯甲脒对EfP-Ⅲ-1,EfP-Ⅲ-2的半数抑制剂量I50分别为2.03μmol和1.48μmol。以6mol／L尿素为洗脱剂,将酶与苯甲脒的混合液用Sephadex G-25分子筛成功分离,BAEE法测定了EfP-Ⅲ-1，EfP-Ⅲ-2的活力恢复分别为62.68%和65.12%。
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