金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎(cow mastitis)的主要病原菌之一,而荚膜多糖和黏附素是金黄色葡萄球菌最主要的毒力因子。当金黄色葡萄球菌侵入机体后,由于荚膜多糖的抗吞噬作用,使其难以被吞噬细胞吞噬清除,进而细菌的黏附素识别并特异性的黏附到组织、细胞的特定分子上是感染的关键,细菌成功定植后,进一步产生酶和毒素,使得感染难以控制。因此本文通过化学方法将荚膜多糖和黏附素蛋白偶联,制备偶联物,并对其进行免疫学特性的研究。从而为构建金黄色葡萄球菌荚膜多糖-黏附素蛋白二价毒力因子疫苗奠定了理论和实验基础。本实验研究在哥伦比亚固体培养基中添加不同的营养成分,通过观察菌落生长情况,从而对金黄色葡萄球菌的培养条件进行优化。用此条件培养的金黄色葡萄球菌菌株,采用加酶法对血清8型荚膜多糖进行提取,并用酚提蛋白法和过柱层析法对提取的粗糖进行纯化,同时用苯酚-硫酸法测定多糖含量。在获得纯化的血清8型荚膜多糖的基础之上,以己二酰肼为间桥,碳二亚胺为偶联剂,纯化的ClfA-FnBPB融合蛋白为载体蛋白,使CP和ClfA-FnBPB偶联制备偶联物。在偶联过程中确定荚膜多糖-蛋白质偶联物的最佳质量比。其次,利用紫外光谱扫描法、苯酚-硫酸法等对偶联物进行定性和定量分析并计算偶联比。最后,用制备的偶联物免疫Ba1B/c小鼠,同时用间接ELISA法检测抗体水平,并对小鼠进行攻毒保护试验,评价免疫效果。结果显示,产生血清8型荚膜多糖的金黄色葡萄球菌在加有1%乳糖、2%NaCl和10%胎牛血清的哥伦比亚固体培养基上生长最旺盛。用此条件培养的菌株提纯的荚膜多糖,其粗糖的纯度为34.43%,精制多糖的纯度为79.68%。核酸和蛋白的含量为0.1365mg/mL。用化学方法制备的荚膜多糖-蛋白质偶联物在其质量比为1：2时可证明偶联成功,计算得到偶联比为1：1.89。采用间接ELISA法检测抗体水平,二免后7天,偶联物组可产生抗体,且抗体效价最高可达1：6400,说明偶联物刺激小鼠产生了免疫应答。阴性对照组和单独多糖组均没有抗体产生,而单独融合蛋白组在二免后产生了抗体反应,但抗体效价较低,最高时仅为1：100。本实验对三免后两周的小鼠进行攻毒保护,结果表明,偶联物组的攻毒保护率最高,可达80%,而阴性对照组、单独多糖组以及单独融合蛋白组的保护率分别为20%、30%和60%,可见荚膜多糖-蛋白质偶联物有较好的免疫原性,达到了本实验的预期目标。