三个miniSTR基因座荧光标记复合扩增体系的建立及其法医学应用研究

来源 :四川大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kms2007
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目的本课题旨在建立新的miniSTR荧光标记复合扩增体系,并按照美国DNA分析方法技术工作组(TWGDAM)的指导方案,进行法医学应用性研究。方法从已有国内频率资料的STR基因座中筛选出可用于设计MiniSTR引物的基因座,进行引物设计;用未标记的新引物在银染显色方法下进行复合扩增实验,选出复合成功基因座定购荧光标记引物;制作等位基因分型标准物;采用美国ABI310遗传分析仪进行荧光标记引物复合扩增试验,并优化扩增条件,对不同退火温度下复合扩增的效果进行研究;对复合扩增系统的灵敏度、基因座的种属特异性、案例应用、降解模型、陈旧样本等法医学应用进行研究。结果成功设计了D19S591,D2S2944,D18S872基因座的小于130bp的miniSTR扩增引物,成功建立了D19S591,D2S2944,D18S872的miniSTR荧光标记复合扩增体系。这一扩增体系条件易于优化,采用国产Taq酶进行扩增,即可得到满意的扩增产物和分型结果。相对于国外昂贵的试剂盒,它是一种成本低廉但效率高的STR基因座复合扩增体系。法医学应用性研究表明:三个基因座有较高的种属特异性;该体系的检测灵敏度为0.25ng模板DNA;通过6个实际检案证明,该体系能用于法医学个人识别和亲权鉴定;通过对陈旧样本和降解模型的研究证明,该体系对降解检材有良好的扩增效果,较常规大片段试剂盒扩增成功率高,可用于常规试剂盒扩增失败的降解样本的分型。结论D19S591,D2S2944,D185872的miniSTR荧光标记复合扩增体系可应用ABI-310检测平台,获得可靠的遗传学数据。该体系扩增条件易于优化,成本低廉,分型结果稳定,种属特异性好,灵敏度和准确度高,对降解检材扩增成功率高,可以应用于法医学实际检案,特别适合对陈旧样本和降解检材的法医学检测。
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