猪伪狂犬病（PR）是由猪伪狂犬病毒（Pseudorabiesvirus,PRV）引起猪的繁殖障碍、共济失调、呼吸困难等症状的一类高接触性传染病,所有年龄段的猪群均易感,且成年猪多隐性感染,不出现症状,但长期排毒,防治排查困难,是现如今养猪业危害最大的传染病之一。目前,没有有效的治疗方法,疫苗预防和猪群净化是防控该病的主要方法。随着人类抗病毒研究的发展,筛选和研制用于免疫失败个体或特殊动物个体的抗PRV药物则成为了可能。很多药物的靶点不是针对病毒的基因,而是作用于改变病毒在宿主内增殖所需的条件来实现抗病毒效力的,因此,药物治疗受毒株差异影响较小。本文研究了米非司酮在对PRV在N2a细胞上的抑制作用和及其初步的作用机理,并通过体内实验研究了米非司酮在小鼠体内的抗病毒效应,以及与另一种抗PRV药物--氢醌的协同作用。本研究为PRV抗病毒药物的研究和临床应用奠定了基础。具体研究内容如下:一、米非司酮对猪伪狂犬病毒的抗病毒作用为了研究米非司酮在N2a细胞上对PRV复制的影响,利用Western-blot和qPCR检测药物处理细胞中PRV的gB蛋白的表达和mRNA水平,结果显示,米非司酮能显著下调PRV的gB的蛋白和基因水平,说明米非司酮对PRV的增殖具有一定的抑制作用。为了排除药物对细胞活力的影响和进一步研究药物的作用,通过cck8细胞活性检测的方法,研究了米非司酮对N2a细胞的细胞毒性作用,并计算出药物对细胞的最大安全浓度(CC50)为54.88 μM,说明药物在20 μM以下对N2a细胞没有毒性。为了研究药物剂量对病毒复制的影响,用不同剂量的药物作用细胞,通过qPCR的方法检测gB的mRNA水平,结果显示,随着米非司酮剂量的上升,PRV的病毒量随之下降。将米非司酮作用于PRV吸附、入胞、复制等不同增殖时期,通过qPCR检测PRV的gB mRNA,结果显示,在复制早期米非司酮能够显著抑制PRV在细胞内的增殖。为了验证该结果,通过Western-blot 检测了 药物对 PRV 早期复制的相关蛋白 EPO、UL54、UL48 表达的影响,结果表明,以上三种早期基因的表达均被抑制,证明米非司酮在PRV复制早期阶段对病毒产生抑制作用。二、米非司酮和氢醌（HQ）协同抗病毒作用实验室前期研究发现氢醌对PRV具有抗病毒作用,为了研究米司非酮是否与氢醌具有协同抗病毒作用,本研究通过体外细胞接种实验和小鼠攻毒保护实验研究了两者的相互作用。首先,用米非司酮和氢醌单独和联合用药处理细胞,接种病毒后收取细胞,利用Western-blot的方法检测PRV的gB蛋白表达水平变化。结果显示,与单独用药组比较,米非司酮与氢醌联合使用对PRV增殖的抑制效果更好。为了进一步验证两种药物在小鼠体内的协同作用,本试验以ICR小鼠为研究对象,进行攻毒保护试验。将65只小鼠分成五组分别为:氢醌+攻毒组、米非司酮+攻毒组、混合用药+攻毒组、攻毒对照组以及空白对照组（每组共13只,5只用于宰杀取样,8只用于观察死亡情况）。每只小鼠皮下攻毒5 LD50的ZJ01病毒,攻毒后8 h,以50 mg/Kg的剂量HQ、40 mg/Kg的RU486分别对给药组小鼠进行腹腔注射给药和皮下多点注射,混合给药组同样剂量和注射方式注射药物,攻毒对照组与空白对照组注射等量的玉米油和生理盐水。每隔12 h注射一次药物,对照组同时注射玉米油和生理盐水,直至实验结束。记录死亡时间和死亡率,并在攻毒后60 h每组随机取5只小鼠宰杀,观察病理变化,测定组织脏器的病毒载量。结果表明,在观察组（共8只）攻毒后第3天开始出现搔痒症状,陆续有小鼠死亡,其中攻毒组的在第三天死亡37.5%（3/8）,第四天死亡87.5%（7/8）,第五天小鼠全部死亡;氢醌组第四天死亡50%（4/8）,第五天死亡75%（6/8）,最终有2只小鼠存活;米非司酮组第四天死亡50%（4/8）,第五天死亡87.5%（7/8）,最终有1只小鼠存活;联合用药组第四天死亡37.5%（3/8）,第5天死亡62.5%（5/8）,最终有3只小鼠存活。在病理解剖中可见攻毒组小鼠的脑部颜色变深,出现充血。而用药组的脑组织病变则较为轻微,单独给药组和联合用药组差异不明显。通过病毒载量的检测,给药组小鼠脑中的病毒载量明显低于未给药组,其中混合给药组的病毒载量最低。以上结果表明,米非司酮能抑制PRV在ICR小鼠体内的增殖,与氢醌联合用药的效果更好。通过体、内外实验证明,米司非酮有抑制PRV复制的作用,与氢醌联合使用,具有明显的协同抗病毒作用。本研究为PRV抗病毒药物的筛选奠定了基础,为PR的药物治疗提供了理论依据。