【摘 要】
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为了探讨5C5分化抗原的功能,本实验室用反义技术制备了5C5分化抗原表达抑制的3D5细胞(AS).本实验首先用基因组PCR确认了转导的5C5 cDNA片段仍然整合在AS细胞基因组DNA中,再用
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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为了探讨5C5分化抗原的功能,本实验室用反义技术制备了5C5分化抗原表达抑制的3D5细胞(AS).本实验首先用基因组PCR确认了转导的5C5 cDNA片段仍然整合在AS细胞基因组DNA中,再用Western印迹肯定了AS细胞中5C5分化抗原的表达仍然被抑制,从而为用mRNA微列阵分析AS 3D5细胞和野生型3D5细胞(W)间mRNA表达的差异作好了准备.实验所用的芯片含有4097个基因,包括原癌基因和抑癌基因、离子通道和运输蛋白基因、细胞周期蛋白基因、外压反应蛋白基因、细胞骨架蛋白和运动相关基因、细胞凋亡相关蛋白基因、DNA合成和修复和重组相关蛋白基因、DNA结合和转录和转录因子基因、细胞受体基因、免疫相关基因、细胞信号传导蛋白基因、代谢相关蛋白基因、蛋白质翻译和合成相关基因、发育相关基因、及其它基因.两次实验中差异表达一致的基因共30个.所有30个基因在AS细胞的表达均降低.它们是干扰素受体1、SMARCC2、ADP核糖基化因子1、钾离子电压门控通道、脂调节的血小板激活因子受体、肿瘤坏死因子受体、TATA box结合蛋白相关因子、腺苷脱氨酶等RT-PCR检测了30个差异表达基因中的9个,见8个与芯片分析的结果基本一致.本论文还就某些基因差异表达的可能生物学意义作了讨论.
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