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背景和目的大肠癌的侵袭以及肝转移是影响患者预后的重要因素,深入研究其机制对于改善大肠癌患者的总体预后有重要作用。大肠癌的侵袭转移以及肝转移是一个多步骤、多环节共同参与的过程,包括原发瘤脱落、进入血管的肿瘤细胞聚集成微瘤栓以及与内皮细胞粘附着床并形成转移灶。进入血管内的肿瘤细胞其肿瘤细胞间的同型粘附和肿瘤细胞与血管内皮细胞以及血液细胞的异型粘附均增强,促进肿瘤微癌栓的形成。而相对于单个细胞,肿瘤微癌栓更易于在循环系统中存活并着床,更加利于肿瘤侵袭转移和门静脉癌栓的形成。因此,研究肿瘤细胞粘附的相关机制对于了解肿瘤侵袭转移和门静脉癌栓形成是十分必要的。材料和方法人大肠癌细胞株SW620。收集我院2002年病理诊断为大肠癌的手术切除标本41例及相应癌旁组织和9例同期良性大肠病组织。应用免疫组化技术检测不同大肠癌组织标本的Ezrin蛋白表达水平及分布,并运用脂质体转染反义寡核苷酸SW620细胞Ezrin表达,比较转染前后细胞粘附、运动和侵袭能力的改变,并用Western Blot和RT-PCR检测黄芩素干预后肿瘤细胞Ezrin蛋白及Ezrin mRNA表达的变化。结果1.免疫组化检测不同大肠癌组织中Ezrin蛋白表达和分布,随着腺癌分化程度的降低ezrin表达的强阳性率增加,并且伴有亚细胞定位的改变。伴有肝转移的结直肠癌免疫染色阳性率高于不伴有肝转移的结直肠癌,且强阳性的比例也增加。2.脂质体转染反义寡核苷酸抑制SW620细胞表达Ezrin脂质体转染反义寡核苷酸技术能够显著抑制SW620细胞的Ezrin表达水平。选择合适的反义寡核苷酸浓度(300M/l)、合适的脂质体浓度(6μg/L)以及足够的转染时间48h,脂质体转染Ezrin反义寡核苷酸能达到90%以上的转染率,并能达到60%以上的抑制率。同时,细胞毒性较低,细胞死亡率无明显增加。3.抑制Ezrin表达对SW620细胞粘附、运动和侵袭能力的影响。抑制Ezrin表达明显抑制SW620细胞体外粘附,侵袭,运动能力。4.黄芩素对SW620细胞增殖的抑制作用随时间的延长和药物浓度的增加,抑制作用逐渐增强,呈明显的时间和剂量依赖性;Western Blot和RT-PCR结果显示,黄芩素明显降低Ezrin、磷酸化Ezrin及Ezrin-mRNA在SW620细胞中的表达。