基于DNA分子的荧光分析新方法研究

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处于基态的分子吸收光能后被激发至激发态,激发态分子不稳定,将很快释放出能量跃迁回基态。若返回到基态时伴随着光子的辐射,这种现象称为荧光。利用能够反映物质特性的荧光光谱来对物质进行定性和定量分析的方法称为荧光分析法。荧光分析法具有灵敏度高和选择性好等优点,其灵敏度一般比分光光度法要高出二至三个数量级。在对微量和痕量药物进行灵敏准确的检测时,荧光分析法显示出了极大的优越性。本论文的主要目是建立一些荧光分析新体系。论文分为两部分。第一部分为综述,主要介绍了荧光分析法的原理及特点,评述了药物的荧光分析法进展以及小分子与核酸相互作用研究进展。第二部分为研究报告,具体内容如下:一、以小牛胸腺DNA为衍生试剂的孔雀石绿荧光分析新方法研究研究发现将小牛胸腺DNA加入到孔雀石绿中,孔雀石绿的荧光强度显著增强。根据此现象,建立了一种测定孔雀石绿的荧光分析新方法。对体系的实验条件(如小牛胸腺DNA的浓度、作用时间、缓冲体系及pH值)进行了详细的研究。本法测定孔雀石绿的线性范围为3.6×10-10~1.8×10-7 g/mL,检出限为1.1×10-10 g/mL。另外,较详细地讨论了孔雀石绿与小牛胸腺DNA的作用方式。二、以单链富G DNA为衍生试剂的小檗碱荧光分析新方法研究在小檗碱存在下,单链富G DNA可以形成G-四聚体结构,此超分子体系具有强的荧光特性,且荧光强度在一定范围内随小檗碱浓度的增大而增强。据此,建立了一种简单、灵敏测定小檗碱的荧光分析法。我们考察了缓冲体系的pH值、DNA的浓度、温度以及反应时间等实验条件对体系荧光强度的影响。本法测定小檗碱的线性范围为6.0×10-9~4.0×10-7g/mL,检出限为1.8×10-9g/mL。三、双嘧达莫荧光分析新方法的研究研究了双嘧达莫在酸性、中性和碱性介质中的荧光性质,发现在碱性介质中双嘧达莫有最大的荧光强度。据此,提出了一种简单、灵敏的双嘧达莫荧光分析法。本法测定荧光强度与双嘧达莫的浓度在1.0×10-9~1.0×10-7g/mL范围内呈线性关系,检出限为3.0×10-10g/mL。此外,通过对双嘧达莫在不同介质中荧光量子产率的测定,解释了在碱性介质中双嘧达莫具有强荧光特性的原因。
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