第一部分 P53^mut、P16和Smad4在人肺腺癌组织中的表达及临床意义目的：探讨P53^mut、P16和Smad4在人肺腺癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法：运用免疫组化法检测120例肺腺癌组织标本中P53mmut、P16和Smad4蛋白的表达,结合临床病例资料,探讨P53突变和P16、Smad4表达缺失与患者临床病理特征及预后的关系。结果：120例患者中有76例（63.3%）检测出有P53突变蛋白表达,54例（45%）检测出P16表达缺失,75例（62.5%）检测出Smad4表达缺失。突变型P53蛋白的表达与肿瘤大小（P=0.041）、临床病理分期（P=0.025）有关。P16蛋白的表达缺失与淋巴结转移（P=0.001）、临床病理分期（P<0.001）有关。Smad4的表达缺失与肿瘤大小（P=0.033）、淋巴结转移（P=0.014）、临床病理分期（P=0.017）及肿瘤分化程度（P=0.022）有关。Kaplan-Meier生存分析显示肿瘤大小（P=0.031）、淋巴结转移（P<0.001）、临床病理分期（P<0.001）、P53突变型蛋白的表达（P=0.038）、P16及Smad4蛋白表达缺失与患者的总生存期相关。多因素回归分析显示仅有淋巴结转移（P=0.014）、P16和Samd4表达缺失（P<0.001）是患者总生存期的独立预后因素。P53、P16及Smad4蛋白在患者肿瘤组织中突变或缺失越多,总生存期越短（P<0.001）。Spearman相关分析结果提示Smad4的表达缺失与P53突变呈负相关（r=-0.196,P=0.032）与P16缺失表达呈正相关（r=0.182,P=0.047）。结论：P53的突变及P16、Smad4表达缺失与肺腺癌的恶性生物学行为和不良预后有关。第二部分外源性P53^mut、P53wt和P16基因过表达对人肺腺癌细胞株H1299生物学功能及Smad4蛋白表达影响的实验研究目的：研究外源性P53^mut、P53wt和P16基因过表达对人肺腺癌细胞株H1299生物学功能及Smad4表达的影响。方法：运用PCR的方法扩增P53^mut、P53wt及P16基因,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-P53^mut、pIRES2-EGFP-P53wt及pIRES2-EGFP-P16,经BamH Ⅰ及Xho Ⅰ双酶切鉴定并测序。通过脂质体法单独或共转染H1299细胞,荧光显微镜下观察细胞中表达的带绿色荧光的增强型荧光蛋白（EGFP）,使用RT-PCR法及Western blot法验证质粒载体的转染效果。用CCK-8试验检测转染后细胞增殖水平的变化。用划痕实验检测转染后细胞迁移能力的变化。用Transwell小室侵袭实验检测转染后细胞侵袭能力的改变。用流式细胞术检测转染后细胞周期和凋亡的变化。用Western blot检测转染后各组细胞Smad4蛋白表达水平的变化。结果：转染72小时后在荧光显微镜下观察到被转染的H1299细胞发绿色荧光。经RT-PCR及Western blot证实转染后的H1299细胞有目的基因的过表达。空载体组细胞在增殖能力、迁移能力、侵袭能力与空白对照组无明显差异（P>0.05）,P53^mut转染组细胞在增殖能力、迁移能力及侵袭能力均较空载体组增强,而P53wt转染组和P53wt、P16联合转染组相应的均较空载体组减弱（P<0.05）,且P53wt和P16联合转染组的抑制作用更明显（P<0.05）。空载体组及P53^mut转染组的细胞周期与空白对照组无明显变化（P>0.05）,而P53wt转染组和P53wt、P16联合转染组出现了G1期阻滞（P<0.05）,且P53wt、P16联合转染组更为明显（P<0.05）。空载体组与空白对照组在细胞凋亡方面无明显差异（P>0.05）,P53^mut转染组细胞凋亡减少,而P53wt转染组和P53wt、P16联合转染组凋亡均增加,且P53wt、P16联合转染组凋亡更为明显（P<0.05）。空载体组与空白对照组在Smad4蛋白表达上无明显差异（P>0.05）,P53^mut组Smad4蛋白表达较空载体组下调（P<0.05）,而P53wt转染组和P53wt、P16联合转染组Smad4表达增强,且P53wt、P16联合转染组表达增强更为明显（P<0.05）。结论：过表达P53^mut基因可增强肺腺癌细胞H1299的增殖、迁移、侵袭能力,减少细胞凋亡、下调Smad4蛋白表达。过表达P53wt或P53wt+P16基因可使H1299细胞的增殖、迁移及侵袭减弱、细胞凋亡增加及G1期细胞阻滞,并促进Smad4蛋白的表达,且以P53wt、P16共表达时该类作用最为明显。