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目的:本研究利用基因工程技术构建猪带绦虫重组Bacillus Calmette-Guérin(BCG)-TSOL18疫苗,研究TSOL18基因在BCG中的表达情况;然后将重组BCG-TSOL18疫苗免疫昆明小鼠,动态观察免疫小鼠血清特异性Ig G和Ig G2a的变化规律,脾淋巴细胞增殖水平及脾淋巴细胞培养上清液IL-2和IL-4的水平,为该疫苗的进一步研究奠定基础。方法:将本室制备保存的重组质粒p GEX-TSOL18经Bam HⅠ和Eco RⅠ双酶切后获得TSOL18目的基因,再将其定向克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体p MV261中,构建p MV261-TSOL18重组质粒,采用电穿孔法将该重组质粒转入BCG中,构建猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,并进行PCR鉴定;将重组BCG-TSOL18疫苗经45℃热诱导表达,通过SDS-PAGE鉴定和Western blot分析重组TSOL18蛋白的表达情况。然后将80只昆明小鼠随机分成4组:(1)腹腔注射组,接种5×106克隆形成单位(CFU)重组BCG-TSOL18疫苗100μl;(2)口服灌胃组,接种4×108 CFU重组BCG-TSOL18疫苗100μl;(3)和(4)分别为BCG和PBS对照组。于疫苗免疫后0、2、4、6和8w,收集血清和脾淋巴细胞,采用ELISA法检测血清特异性Ig G和Ig G2a水平及脾淋巴细胞培养上清液IL-2和IL-4水平;采用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖水平。结果:重组质粒p GEX-TSOL18经双酶切鉴定成功获得393bp TSOL18目的基因;重组质粒p MV261-TSOL18经双酶切、PCR和测序证实构建成功;重组BCG-TSOL18疫苗经PCR证实构建成功;SDS-PAGE证实重组质粒p MV261-TSOL18在BCG中经热诱导后能够表达相对分子质量(Mr)约为14.7k Da的重组TSOL18目的蛋白,Western blot分析示该重组蛋白有特异的抗原性。动态观察表明:疫苗腹腔注射组和口服灌胃组小鼠血清特异性Ig G和Ig G2a水平均在免疫后2~8w升高,均在免疫后6w达较高水平;脾淋巴细胞增殖水平均在免疫后2~8w升高,均在免疫后6w达较高水平;脾淋巴细胞培养上清液IL-2和IL-4水平均在免疫后2~8w和4~6w升高,均在免疫后 6w和4w达较高水平。结论:1.成功构建了猪带绦虫重组质粒p MV261-TSOL18。2.成功构建了猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗。3.猪带绦虫TSOL18基因能在BCG中诱导表达,且表达的重组TSOL18蛋白具有特异的抗原性。4.猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗可诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。