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本文从珀溪蜜柚黑斑病菌Phyllosticta citriasiana的生长特性、寄主范围、代谢活性组分、遗传转化及绿色荧光蛋白标记等内容进行研究,取得结果如下：P. citriasiana菌丝生长对温度敏感,人工培养条件下,培养温度≥40℃或≤10℃时,菌丝生长完全受抑制。培养温度在15℃-35℃之间,菌丝生长速率呈现先增长后骤降的趋势,在培养温度为25℃时菌丝生长速率最快,7d的菌落直径达3.41cm,30℃次之(3.25cm),它们与15℃(1.29cm)、20℃(1.49cm)和35℃(0.68cm)的生长速率存在显著差异,表明25-30℃较适宜该菌菌丝生长。菌丝在SOA培养基生长速率最快(9d),与在OA培养基上的生长速率存在显著差异,OA培养基上添加2%的山梨醇可以促进菌丝的生长。菌丝生长对光照强度敏感,光照强度为0 Lux(黑暗条件)时生长速率最快,而光照强度为1980 Lux条件下的生长速率显著降低。P. citriasiana分生孢子在1%葡萄糖溶液、10%葡萄糖溶液和水中的萌发率随着萌发时间的延长(0-72h),萌发率先升高后降低,在萌发48h时,萌发率最高,分别为61.4%、39.1%、52.7%。在水中添加1%或10%的葡萄糖,能使分生孢子24h的萌发率显著提高,但在水中萌发48h的萌发率与在1%葡萄糖中萌发48h的萌发率差异不显著,表明1%或10%葡萄糖溶液仅在短时间内促进P. citriasiana分生孢子萌发。分生孢子在0.7M NaCl溶液中的萌发率低,最大值仅为16.4%(72h内)。菌丝和分生孢子的致死温度为≥55℃水浴15min。P. citriasiana对柑橘属28份植物的致病性测定结果发现,P. citriasiana的致病谱比较窄,除了能侵染珀溪蜜柚外,还可以侵染柚子中的龙柚1号、龙柚2号、葡萄柚、坪山柚,以及柠檬中的费米耐劳白花2号柠檬、五峰2号柠檬和海南药用柠檬。P. citriasiana菌丝的培养滤液对琯溪蜜柚叶片具有生物活性,在刺伤部位形成黄褐色斑,类似于P. citriasiana侵染的发病症状。培养滤液的活性组分较耐高温,在80℃水浴处理15min后,仍对珀溪蜜柚叶片具有生物活性。将滤液通过直接减压浓缩或乙酸乙酯萃取浓缩,甲醇溶解过滤后,均在367nm处具有较强的紫外吸收峰。浓缩物经无菌水溶解后,能使刺伤的鹅绒藤Cynanchum chinense叶片形成黄黑色斑,而对刺伤的胜红蓟Ageratum conyzoides叶片无生物活性。P. citriasiana菌丝在CM、SCM和0.6M TB-Sucrose液体培养基上,25℃、120rpm条件下振荡培养3d,可形成鲜白或黄白的菌丝团或菌丝球。单独使用裂解酶或崩溃酶裂解菌丝形成的原生质体较少,分别用35mg/mL裂解酶和10mg/mL崩溃酶裂解菌丝3h,形成的原生质体浓度低,仅为8.167×105个／mL和1.0×105个／mL。而用30mg/mL裂解酶+15mg/mL崩溃酶能取得最佳的裂解效果,形成的原生质体浓度达1.24×107个／ml-。原生质体在OCM平板上的再生率可达12.6%。利用PEG-CaCl2介导原生质体转化法,将pCT74质粒(含GFP基因及潮霉素B抗性基因)转化至P. citriasiana的原生质体,再用含潮霉素浓度为150μg/mL-250μg/mL的双层OCM平板法筛选,经荧光观察及PCR方法验证,可成功转化获得含有绿色荧光蛋白标记的转化子。