【摘 要】
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目的:研究NUF-2基因表达下调对肝细胞癌的增殖及细胞周期的影响。材料与方法:1.选定HepG2、BEL-7404、SMMC-7721、BEL-7402四种肝癌细胞株与正常肝细胞株HL-7702为研究目标,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检验NUF-2在上述细胞中的表达情况;2.挑选NUF-2高表达的肝癌细胞株,通过RNA干扰技术构建抑制NUF-2基因表达的慢病毒载体;3.用慢病毒感染选定
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目的:研究NUF-2基因表达下调对肝细胞癌的增殖及细胞周期的影响。材料与方法:1.选定HepG2、BEL-7404、SMMC-7721、BEL-7402四种肝癌细胞株与正常肝细胞株HL-7702为研究目标,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检验NUF-2在上述细胞中的表达情况;2.挑选NUF-2高表达的肝癌细胞株,通过RNA干扰技术构建抑制NUF-2基因表达的慢病毒载体;3.用慢病毒感染选定的肝癌细胞株,获取NUF-2被稳定抑制表达的肝癌细胞株;4.通过qRT-PCR检测肝癌细胞中NUF-2 mRNA表达情况;5.通过Western blotting检验肝癌细胞抑制NUF-2表达后蛋白表达效果;6.通过Celigo细胞荧光计数法及MTT实验检测抑制NUF-2表达后肝癌细胞增殖能力的影响;7.通过流式细胞仪检测抑制NUF-2表达后肝癌细胞细胞周期的改变情况。结果:1.在4种人肝癌细胞系(SMMC-7721、HepG2、BEL-7404、BEL-7402)中NUF-2基因的表达:荧光实时定量PCR(qRT-PCR)实验结果显示,4种肝癌细胞系(HepG2、BEL-7404、SMMC-7721、BEL-740)的NUF-2的mRNA水平较正常肝癌细胞系HL-7702显著增高,其中以肝癌细胞SMMC-7721的mRNA表达量最高;2.通过慢病毒介导抑制SMMC-7721人肝癌细胞中的NUF-2,实验结果显示,体外NUF-2的缺失明显抑制了肝细胞癌蛋白形成能力,此外,抑制NUF-2表达,可显著下降肝癌细胞增殖能力,可诱导细胞周期阻滞,处于G1期的肝癌细胞增多。结论:NUF-2基因在人肝细胞癌中表达明显增高,抑制NUF-2表达,可显著下降肝癌细胞增殖能力,使细胞周期阻滞。
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