黄芩素对人乳腺癌细胞株MCF-7体外增殖和凋亡的影响

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目的:通过体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7,观察黄芩素对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响及凋亡抑制蛋白Livin和增殖核蛋白Ki67的表达,探讨黄芩素对人乳腺癌细胞株MCF-7抑制作用的机制及其临床意义。方法:1.采用水溶性四氮唑-8(Water Soluble Tetrazolium-8,WST-8)比色法检测黄芩素在不同浓度(5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L、40.0μmol/L、80.0μmol/L、160.0μmol/L)不同作用时间(24h、48h、72h)条件下对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖活性的影响。2.通过流式细胞仪(FlowCytometry, FCM)采用Annexin V-FITC/PI法检测经不同浓度(5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L、40.0μmol/L、80.0μmol/L、160.0μmol/L)处理的黄芩素在不同时间(24h、48h、72h)条件下对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响。3.通过免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)技术检测经不同浓度(5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L、40.0μmol/L、80.0μmol/L、160.0μmol/L)处理的黄芩素在不同时间(24h、48h、72h)条件下作用于人乳腺癌细胞株MCF-7,人乳腺癌细胞株MCF-7中Livin和Ki67蛋白表达情况。结果:1.相同黄芩素浓度,不同作用时间(24h、48h、72h),各组间比较P<0.05;相同时间,不同黄芩素浓度(5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L、40.0μmol/L、80.0μmol/L、160.0μmol/L),各组与对照组之间,以及各浓度组间比较P<0.05;并且黄芩素抑制细胞增殖作用呈时间-剂量依赖性。2.相同黄芩素浓度,不同作用时间(24h、48h、72h),各浓度组间比较P<0.05;相同时间,不同黄芩素浓度(5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L、40.0μmol/L、80.0μmol/L、160.0μmol/L),各组与对照组之间,以及各浓度组间比较P<0.05,并且黄芩素对人乳腺癌细胞株MCF-7促凋亡作用呈时间-剂量依赖性。3.相同黄芩素浓度,不同作用时间(24h、48h、72h),Livin蛋白的表达量,在各浓度组间比较P<0.05;相同时间,不同黄芩素浓度(5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L、40.0μmol/L、80.0μmol/L、160.0μmol/L),Livin蛋白的表达量,在各组与对照组之间,以及各浓度组间比较P<0.05。相同黄芩素浓度,不同作用时间(24h、48h、72h),Ki67蛋白的表达量,在各浓度组间比较,除了对照组在24h和48h间的比较P>0.05,其余各组间比较都是P<0.05;相同时间,不同黄芩素浓度(5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L、40.0μmol/L、80.0μmol/L、160.0μmol/L),Ki67蛋白的表达量,除了24h中对照组与黄芩素浓度为5.0μmol/L组比较P>0.05,其余各组与对照组之间,以及各浓度组间比较P<0.05。4. Livin与Ki67蛋白表达呈正相关,r24h=0.604,r48h=0.731,r72h=0.983,P<0.05。结论:1.黄芩素可能对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖活性具有抑制作用,并且抑制作用呈时间-剂量依赖性;2.黄芩素可能对人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡具有促进作用,并且促凋亡作用呈时间-剂量依赖性;3. Livin和Ki67之间可能存在正相关;4.黄芩素可能下调人乳腺癌细胞株MCF-7中Livin和Ki67蛋白的表达,推测黄芩素可能通过抑制Livin和Ki67的表达,诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡,从而可能应用于乳腺癌临床治疗。
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