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核酸和蛋白质是生命现象的物质基础,对于它们的研究已经成为生命科学的重要内容。核酸是生物的基本遗传物质,是一种非常重要的生物大分子,与生物的生长,发育以及癌变,突变等异常活动相关。核酸的定量测定是生物化学和其它生物学科中经常涉及的分析任务,也是许多生化药物分离提纯中质量检验及食品检验中常见的分析项目,而测定的结果为临床检验中疾病诊断及治疗提供了科学依据。
探针技术是研究核酸和蛋白质结构、功能、定性、定量的重要手段,对核酸探针的研究已成为生命科学领域的前沿课题。本论文主要研究了新的核酸探针及维生素的灵敏的分析方法,并探讨了维生素与核酸之间相互作用的机理和发光机理。
在论文的第一部分中,介绍了研究核酸与药物分子之间相互作用的主要手段,综述了荧光和共振光散射技术在核酸测定中的分析应用和维生素类药物的荧光分析进展。
在论文的第二部分中,研究了核酸对Rutin-La<3+>体系的荧光增强效应,并将其应用于核酸的定量测定。研究发现,在Tris-HCl缓冲溶液中,核酸能明显增强Rutin-La<3+>的荧光强度,其增强程度与核酸的浓度在一定范围内呈良好的线性关系。在最佳条件下,fsDNA和yRNA的线性范围分别为8×10<-8>-1×10<-5>g/nL和1×10<-7>-9x10<-6>g/mL,检出限为8×10<-8>和5.4x10<-8>g/mL。该方法已用于合成样品的测定,其结果令人满意。机理研究表明,Rutin-La<3+>通过静电引力和核酸发生反应,从而形成一个大的Rutin--La<3+>--核酸络合物。同时,核酸为Rutin--La<3+>体系提供良好的疏水环境,降低了Rutin-La<3+>和水分子之间的碰撞,减少了因碰撞而导致的能量损失,提高了荧光量子效率,使体系的荧光强度大大增强。
论文的第三部分,研究了烟酸-Eu<3+>--核酸体系的散射光增强效应,并建立了测定核酸的新方法。研究发现,在Tds-HCI缓冲溶液中,核酸能明显增强烟酸-Eu<3+>体系的散射光强度。在最佳实验条件下,散射光增强的程度在一定范围内与核酸的浓度成线性关系。fsDNA的线性范围为7×10<-8>-1×10<-5>g/mL,检出限为2×10<-8>g/mL。该方法已用于合成样品的测定,结果令人满意。机理研究表明,核酸与烟酸-Eu<3+>之间是通过静电作用结合的。论文的第四部分主要研究了叶酸-Eu<3+>体系的荧光特性,并用于叶酸的定量测定。机理研究表明,叶酸经氧化后,生成了喋呤-6-羧酸,它能与Eu<3+>生成络合物。当用光照射时,叶酸的氧化产物将吸收的能量通过分子内能量转移传递给Eu<3+>,从而发射Eu<3+>的特征荧光,由此建立了叶酸的灵敏测定方法。增强的荧光强度在一定范围内与叶酸的浓度成线性关系。在最佳实验条件下,叶酸的线性范围分别为4×10<-8>-4x10<-5>mol/L,检出限分别为1.2x10<-8>mol/L。该法已用于实际样品中叶酸含量的测定,结果令人满意。
本论文的主要特点:
1.研究表明,核酸对稀土金属离子配合物Rutin-La<3+>的荧光具有明显的增强效应,由此建立了测定核酸的荧光光度法,并已用于合成样品的测定。机理研究认为核酸通过静电引力与Rutin-La<3+>形成了三元络合物,而核酸为Rutin-La<3+>体系提供了一个疏水环境,减少了与水分子碰撞而造成的能量损失,从而提高了体系的荧光强度。
2.研究指出,核酸通过静电引力作用与烟酸一Eu<3+>体系结合成络合物,从而增强了烟酸-Eu<3+>体系的散射光强度。由此建立了测定核酸的光散射技术,并用于合成样品中核酸的测定。该方法具有简便快速、稳定性好的特点。
3.研究发现,叶酸被氧化后能与Fu<3+>生成络合物,并发射Eu<3+>的特征荧光。机理研究认为,叶酸氧化产物通过分子内能量转移将吸收的能量传递给Eu<3+>,从而发射Eu<3+>的特征荧光。据此建立了灵敏的测定叶酸的荧光方法,并用于实际样品中叶酸的测定。