外源性光敏剂—血卟啉单甲醚和内源性光敏剂ALA的对比实验研究

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光敏剂是指在化学反应中,这一类只吸收光子并将能量传递给那些不能吸收光子的分子,促使这些分子发生化学反应,而光敏剂本身却不会参与化学反应,只是回复到原先的状态。由光敏剂引发的光化学反应则称为光敏反应。在反应中,有氧分子参与的伴随生物效应的光敏反应成为光动力反应,可引发光动力反应破坏细胞结构的药物称为光敏药物。  本文以外源性光敏剂血卟啉单甲醚和内源性光敏剂ALA为研究对象。从它们的特性入手,研究光敏剂在光动力疗法过程中的荧光光谱和他们对HL60细胞的毒性作用,ALA-PDT对HL60细胞的线粒体的光漂白效果。从而确定实验参数以进一步研究HMME-PDT过程中细胞内钙离子浓度的变化和光动力疗法效果的关系。  实验结论如下:(1)原卟啉的吸收峰在407nm附近,光敏剂HMME的吸收峰集中在390-410nm之间,特征荧光峰集中在620nm和675nm附近。HL60细胞液在506.4nm处存在荧光光峰,且在没有ALA参与的情况下,线粒体荧光强度基本是保持不变的。(2)在光动力治疗过程中,随着光照时间的增加。光敏剂HMME位于620nm和675nm两处的特征荧光强度和荧光强度逐渐减弱,且荧光强度减弱的速度也随之减慢。这说明光敏剂浓度越大,光漂白速率越大,反之,光漂白速率越小。(3)ALA-PDT的荧光峰在529nm附近。线粒体荧光强度随着光照时间的增加而下降.且最佳光照时间为60min。(4)使用HMME作为光敏剂进行光动力疗法的时候,最佳参数为:HMME浓度50μg/ml,光照剂量24J/cm2。且灭活效率为70.2%。(5)HL60细胞的ALA-PDT最佳孵育时间为4h。(6)在HMME-DPT进行到60min之后,HL60细胞内的钙离子浓度随着HMME的浓度增加而增加,同时细胞的凋亡率也在不断提高。
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