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骆驼体内存在天然缺失轻链的重链抗体（HcAb）,其单域抗原结合片段叫作VHH或纳米抗体（nanobody,Nb）,是目前已知能够结合抗原的最小实体。纳米抗体独特性质使得VHH在基础研究、诊断及治疗上具有极大的应用价值。与传统抗体相比,纳米抗体具有较好的可溶性,但是同种纳米抗体在不同表达系统中的表达量及不同纳米抗体在相同表达系统中的表达量存在较大差异,因此在表达纳米抗体时需要对其表达系统进行优化,从而提高其产量,降低生产成本。本研究为了实现本实验室保存的纳米抗体序列VHH10和VHH16的高效表达,在前人研究的基础上,首先,利用大肠杆菌表达系统(与DsbA-DsbAmut融合表达)表达VHH10及VHH16,其纯化后产量分别是642 mg/L、348 mg/L。利用肠激酶对融合蛋白DsbA-DsbAmut-VHH10及DsbA-DsbAmut-VHH16进行酶切处理,以获得天然单体纳米抗体,最终单体产量分别是14.7 mg/L、8.9 mg/L。然后,为了探究大肠杆菌中表达的VHH10及VHH16的抗原结合活性与热稳定性,利用双抗夹心Elisa对其进行验证,VHH10及VHH16均具有良好的抗原结合活性与热稳定性。最后,尝试应用枯草芽孢杆菌与毕赤酵母对VHH10及VHH16进行表达,结合离子交换层析与亲和层析对纳米抗体进行纯化,计算每升发酵液中纳米抗体的产量,枯草芽孢杆菌表达系统最终获得纳米抗体产量分别是2.3 mg/L、1.8 mg/L。毕赤酵母表达系统最终获得纳米抗体产量分别是3.8 mg/L、2.5 mg/L。虽然大肠杆菌表达系统需要经过酶切以及二次纯化过程,但是大肠杆菌发酵周期短,最终获得纳米抗体产量高于其他两种表达系统,同时,DsbA-DsbAmut的存在对纳米抗体特异性结合抗原的活性及热稳定性没有影响。该表达策略可为其他纳米抗体的高效表达提供借鉴和参考。