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研究背景和目的:乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV),作为一种对人类健康造成极大危害的病原体,常引起人类急慢性传染性病毒性肝炎,并最终可逐渐演变成慢性乙型肝炎、肝硬化、终末期肝病以及肝细胞癌。每年有数十万人死于与慢性乙型肝炎相关联的疾病,对全球公共健康造成了巨大的威胁。Ⅰ型干扰素(Interferonα,IFNα),常规用于慢性乙肝病毒感染患者的治疗,通过诱导数百个干扰素刺激基因(interferon stimulated genes,ISGs)的表达,在抗病毒防御中发挥着至关重要的作用。而这些ISGs中就包括泛素特异性蛋白酶USP18(ubiquitin-specific protease 18,USP18),它是Ⅰ型干扰素信号通路的一种负性调控因子。在干扰素治疗无效的慢性乙肝患者的肝组织中,USP18的表达水平明显增高。然而,USP18是否影响HBV持续性感染以及是否与HBV耐受干扰素有关联尚未完全清楚。因此,本研究的目的在于探索USP18在HBV持续感染中的作用及其潜在机制。实验方法:高转wild type USP18(WT-USP18,或简称为USP18)或USP18-C64S无蛋白酶活性突变质粒至HepAD38细胞中,抽提细胞内总RNA,逆转录成cDNA或试剂盒直接提取HBV DNA。实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附实验ELISA定量检测HBV的产生和蛋白表达。高转USP18或USP18-C64S质粒至HepAD38细胞中,外源性干扰素处理后,在不同的水平检测Ⅰ型干扰素信号通路激活情况:p-STAT1水平(蛋白免疫印迹实验),IRSE活性(双荧光报告基因实验)以及典型ISGs的表达(实时荧光定量PCR)。高转HBV病毒蛋白质粒至293T细胞,免疫共沉淀实验筛选与内源性USP18存在蛋白质相互作用的HBV病毒蛋白。研究结果:过表达USP18或USP18-C64S可以增加HBV胞内pgRNA,总DNA,cccDNA和细胞培养上清中的HBV DNA 水平。过表达USP18可以从p-STAT1 水平、IRSE活性以及ISGs的表达三个水平抑制IFNα诱导的Ⅰ型干扰素信号通路。USP18与HBV的DNA多聚酶,大表面蛋白以及中表面蛋白存在相互作用,但与Core蛋白和HBx蛋白无相互作用。研究结论:过表达USP18刺激HBV产生但与其酶活性无关。过表达USP18能够抑制IFNα诱导的型干扰素信号通路。同时USP18与HBV病毒蛋白(Pol,LHBs,MHBs)存在蛋白质相互作用。这些研究为探索USP18在HBV感染后宿主天然免疫应答中的作用,研究HBV逃逸宿主免疫攻击、揭示HBV耐药机制,发展抗HBV新策略提供了新思路。