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血栓性疾病一直以来严重危害着人类的健康,不仅发病率高,而且死亡率和致残率也很高。据世界卫生组织调查显示,全世界血栓性疾病不少于1500万人,而且还有上升的趋势。发展高效特异性溶栓药物是防治血栓性疾病的重要手段。目前常见的溶栓药物存在着以下缺点:缺乏特异性,具有抗原性,半衰期短,用量大,价格贵等。因此寻找选择性高、副作用小、价格低廉的抗栓药剂很有必要。而微生物是溶栓药物的重要来源,其生长速度快,生长条件易于控制,提取工艺也较简单,因此,以微生物代谢产物作为溶栓药物(纤溶活性物质)的研究越来越受到重视,寻找新的溶栓药物也成为国内外医药界的研究热点,另外,微生物生态环境和种类的多样性是天然物质的宝库,本研究即是在土壤中分离筛选得到产纤溶酶的菌株,并对其进行研究。本文从土壤中分离出60株产纤溶酶的菌株,并且从中筛选出一株具有较高纤溶活性的菌株lw-72,并对其进行了菌种鉴定、摇瓶发酵工艺优化、纤溶酶的提取、分离纯化以及酶学性质的研究。通过对菌株lw-72进行形态观察、生理生化试验,以及对16S rDNA序列进行测定与比对,表明菌株lw-72与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的生理生化特征相符,与其16S rDNA序列也有高达99.86%的同源性。因此,认为菌株lw-72为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。采用单因子试验和正交试验对地衣芽孢杆菌lw-72(Bacillus licheniformis)进行摇瓶发酵工艺优化,优化后的培养基组成为:玉米粉0.5%、黄豆饼粉2.0%、Na2HPO4 0.4%、NaH2PO4 0.2%、CaCl2·2H2O 0.01%、KCl 0.01%;培养基初始pH为7.0;装液量30 mL/250 mL摇瓶,接种量10%,发酵时间为72 h。在该条件下发酵液中纤溶酶酶活力为622 U/mL,是初始发酵培养基的3.4倍。利用硫酸铵沉淀和阴离子交换色谱从地衣芽孢杆菌lw-72(Bacillus licheniformis)中分离纯化出具有纤溶活性的单一组分蛋白(BlFE),利用质谱法进行测序。并对其进行性质分析。BlFE表观分子量大约为25 kD;等电点为8.3左右;在4℃~50℃基本保持稳定,50℃以上活性则迅速下降;pH值6~10之间,活性保留了99%,在pH值为3时,活性为0,pH值大于10时,活性有所下降;金属离子Na+,K+,Ca2+,Mg2+,Zn2+,Mn2+,对酶活有轻微的促进作用,Fe2+,Cu2+对酶活有一定的抑制作用;尿素对蛋白的抑制作用较强,SDS和Triton-X100的作用较弱,但仍然可抑制其活性。胰蛋白酶对其活性有增强的作用。Km值为2.237mg/mL。