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本文为满足我国人工养殖黑熊及其合理利用的需要,从分子生物学水平收集亚洲黑熊种质资源方面的资料、探讨黑熊种属间的亲缘关系,为黑熊生态、遗传、繁殖与发育方面提供依据。
沿用本室改进的粪便提取方法,参照马来熊BDNF基因序列设计引物,首次从亚洲黑熊粪便DNA中扩增和克隆到包含完整核BDNF基因的753bp片段,以毛发作阳性对照并进行重复实验,获得稳定一致结果。序列分析表明,亚洲黑熊的BDNF基因非常保守,与人相比,一致性达94.5%,与大熊猫比达98.9%。在推导的多肽序列中,其成熟区氨基酸序列与所有已报道哺乳动物的完全一致;对亚洲黑熊及其相关物种BDNF基因序列的比较分析,发现大熊猫与包括黑熊在内的熊科动物亲缘关系更近,而与小熊猫较远。本文首次采用非损伤性取样法在分子生物学水平对亚洲黑熊基因组核BDNF基因进行分析,不仅为亚洲黑熊的保护和繁育提供重要参考资料,为非损伤性取样在珍稀濒危野生动物研究中的应用拓宽了思路,也为亚洲黑熊及其近缘种的系统分类研究提供分子证据。
借鉴互联网中已经克隆到的抑制素βA亚基基因的序列,设计并合成一对兼并引物,首次扩增和克隆到亚洲黑熊的βA亚基基因的357bp片段,以水作为阴性对照排除污染,多次重复实验获得一致稳定的结果。序列分析显示此片段在处于不同进化程度的物种之间仍然具有高度的保守性,亚洲黑熊βA亚基基因与人的相比有29个核苷酸差异,一致性高达91.6%;与亲缘关系较近的大熊猫、小熊猫和马来熊相比,分别有4、20、3个核苷酸差异,一致性分别为98.9%、94.4%、99.2%。系统发育分析和酶切图谱分析显示亚洲黑熊、大熊猫和马来熊具有较近的亲缘关系,而它们与小熊猫的亲缘关系较远。