三种念珠菌体外药物敏感试验方法比较研究

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背景:近十年来,真菌的感染急剧增加,念珠菌为医院感染的主要致病真菌,其中白念珠菌最为常见。目前治疗念珠菌的常用药物为氟康唑、伊曲康唑等。由于抗真菌药的广泛应用,耐药菌株的比例逐渐增高,为了临床上合理有效治疗念珠菌感染,减少耐药菌株的产生,必须积极开展体外抗念珠菌药物敏感性试验。近年来已研究出几种新的念珠菌药敏试验方法,在治疗念珠菌病方面起到了重大作用,但是目前尚需对各种试验方法进行比较研究,明确各方法的优缺点,以便在不同的临床实验室推广应用。现在国内外采用较多的是E-test法和M27-A法,亦有少数学者把MTT法用于NCCLS酵母菌的M27-A方案,皆取得了很好的可行性。国内外可见有关M27-A法和E-test法的比较研究,但鲜有MTT法和M27-A法的对比研究,更未见在同一条件下的三种方法的平行比较研究。 目的:了解念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的敏感性,比较三种念珠菌体外药敏试验方法,即E-test法、M27-A法和MTT法用于念珠菌体外药敏试验中,寻找各自优缺点,为制定更为客观方便、准确可靠、重复性好、灵敏和标准的念珠菌体外药敏试验方法提供依据,以评价新药和指导临床用药。 材料与方法:取临床标本进行念珠菌培养,按常规方法、血清芽管试验和酵母菌生化卡(YBC)与VITEK系统联合使用,分离鉴定念珠菌。抗真菌药物用氟康唑和伊曲康唑,按倍比浓度稀释成0.5~12μg/ml和0.125~3μg/ml各10个浓度梯度,同时还用两种药的E-test试剂条,在相同条件下进行E-test法、M27-A法和MTT法三种药敏试验,测定临床分离念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的最低抑菌浓度MIC值的分布范围,并分别计算三法对氟康唑和伊曲康唑的敏感率,试验中平行检测3株标准质控株。 结果:43株临床分离株中白念珠菌30株(69.8%)、近平滑念珠菌6株(14.0%)和光滑念珠菌4株(9.3%),季也蒙念珠菌2株(4.7%),丛生丝孢酵母菌1株(2.3%)。三法所测念珠菌对氟康唑的总敏感率分别是86.0%、93.0%、93.0%,两两比较无统计学差异;对伊曲康唑的总敏感率分别是51.2%、69.8%、67.4%,两两比较无统计学差异。氟康唑的总敏感率略高于伊曲康唑,对氟康唑耐药的菌株往往对伊曲康唑也耐药。 结论:三种试验方法有很好的一致性,且三法各有优缺点。其中E-test法操作简单,在常规实验室即可进行。M27-A法有用药物和试剂量少的优点。E-test法和M27-A法结果判读均有一定的主观性,且不能确切读出真菌抑制的百分数,更不适于伊曲康唑等抑菌有拖尾现象的抗真菌药物的药敏试验。而MTT法可得到更为准确、客观、量化的结果,可同时计算出药物各浓度对真菌的抑制率,使结果更易于分析,是一种客观可靠、灵敏稳定、操作可半自动化的念珠菌药敏试验方法,有较广阔的应用前景,但是操作较为繁琐,且需特殊仪器。
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