DNA损伤生物标志物8-羟基脱氧鸟苷检测新方法及其应用研究

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DNA加合物是化学毒物经生物转化后的亲电活性产物与DNA分子形成的共价结合物,它既是一种暴露标志物,又是一种效应标志物。8-羟基脱氧鸟苷是DNA损伤生物标志物中最有代表性的一种。建立8-羟基脱氧鸟苷的检测新方法具有重要的生物医学意义。 在本文第二章,用共振光散射技术建立了8-羟基脱氧鸟苷的检测新方法。研究表明:在pH9.0的R.B缓冲液中,吡啰红Y阳离子染料与8-羟基脱氧鸟苷阴离子形成离子缔合物,导致体系的共振光散射增强。在优化的实验条件下,体系的共振光散射强度随着8-羟基脱氧鸟苷的加入在339nm处急剧增强。共振光散射的增强(△IRLS)与8-羟基脱氧鸟苷浓度成线性关系,据此建立8-羟基脱氧鸟苷的共振光散射检测新方法,方法的线性范围为50.0~226.4ng/ml,检出限为15.2ng/ml,RSD=8.8%,平均加标回收率=94.6%。 在本文第三章,用能量转移技术建立了鱼精蛋白荧光猝灭法检测8-羟基脱氧鸟苷的新方法。在25℃、pH8.2的Tris-HCl缓冲溶液中,在0.50~7.1μg/ml范围内,8-羟基脱氧鸟苷浓度与鱼精蛋白的荧光猝灭强度成线性关系,r=0.9963,方法的检出限为0.18μg/ml,RSD=6.2%,平均加标回收率为104%(n=6)。 在本文第四章,应用荧光光谱法研究了8-羟基脱氧鸟苷与鱼精蛋白的作用机制。实验表明,8-羟基脱氧鸟苷与鱼精蛋白的相互结合作用为静态荧光猝灭过程;
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